前言：尋找寫作靈感？中文期刊網(wǎng)用心挑選的不同運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠AMPK分泌的影響，希望能為您的閱讀和創(chuàng)作帶來靈感，歡迎大家閱讀并分享。

作者：王兵 單位：西安工業(yè)大學(xué)體育學(xué)院

1材料與方法

1．1動(dòng)物模型的建立

健康雄性SD大鼠60只，體重約200～250g．室溫20～22℃，相對(duì)濕度保持在45％～55％之間，動(dòng)物飼養(yǎng)房采取12h黑暗與12h光照交替循環(huán)的模式．實(shí)驗(yàn)大鼠購(gòu)入后先適應(yīng)性飼養(yǎng)l周后，將大鼠隨機(jī)分為安靜對(duì)照組（C組）、中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（ME組）和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（HE組），每組20只．安靜對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，不加干預(yù)．運(yùn)動(dòng)組在電動(dòng)鼠類跑臺(tái)上進(jìn)行不同強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，持續(xù)8周，每周訓(xùn)練6天，訓(xùn)練強(qiáng)度參照Bedford［3］的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷標(biāo)準(zhǔn)．運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度分級(jí)為：中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)的大鼠跑速12m／min、大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)的大鼠跑速18m／min，持續(xù)時(shí)間20min，隔日增加速度分別至15m／min和18m／min增加時(shí)間30min，依次累加，當(dāng)跑速分別達(dá)20m／min和30m／min，時(shí)間60min后，跑臺(tái)傾斜5°，維持此強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)，5d／w，持續(xù)8w結(jié)束．

1．2試劑與儀器

1．2．1試劑采用ampkα1／2抗體，β—actin抗體，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1．2．2主要儀器采用MINI－PROTEIN垂直電泳糟，低溫高速離心機(jī)，Odyssey紅外掃描儀，勻漿機(jī)（PT－MR2100，CE）．

1．3蛋白表達(dá)的蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）分析ME組和HE組于訓(xùn)練結(jié)束后24h內(nèi)進(jìn)行，大鼠戊巴比妥鈉（注射量為：40mg／100g體重）進(jìn)行腹腔注射麻醉后，暴露大鼠的胸腔并取出心臟，將其放入生理鹽溶液進(jìn)行血液洗凈．依據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)資料，從左心室心尖部位剪取少量的心肌組織，按每lmg心肌組織加入40μL勻漿緩沖液內(nèi)，用勻漿機(jī)制備成勻漿．將肌肉勻漿分裝于準(zhǔn)備好的離心管中，溫度定位80℃，持續(xù)加熱5min，置于－20℃冰箱保存［4］．使用時(shí)先進(jìn)行解凍，100℃持續(xù)加熱5min，10000r／min離心3min后即刻取上清液進(jìn)行上樣．蛋白分離我們采用的是SDS－PAGE系統(tǒng)，采用Laemmli積層膠（濃度為4％）的及濃度為10％的分離膠，每道上樣孔加樣約為3g的蛋白質(zhì)樣品，在20mA／gel的恒流電下進(jìn)行電泳，后轉(zhuǎn)膜．轉(zhuǎn)膜完畢取出膜放入封閉緩沖液中封閉60分鐘后．放入一抗（1∶1000稀釋）中，4℃搖動(dòng)過夜．一抗孵育結(jié)束后，TBS清洗．將膜置于二抗（1∶10000稀釋）室溫避光輕搖1h，TBS清洗［5］．使用推廣度較高的Odyssey紅外掃描儀，選擇激發(fā)波長(zhǎng)（anti－rabbit，700nm）對(duì)整個(gè)膜進(jìn)行掃描，并得出最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果．

1．4圖像分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用傳統(tǒng)的Image軟件對(duì)所有圖像進(jìn)行分析，選擇樣本目標(biāo)條帶，測(cè)定條帶光密度．用Origin7．0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)蛋白進(jìn)行半定量分析．各組有效實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用mean＋SEM的形式表示，并使用SPSS社會(huì)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)隨機(jī)區(qū)組的有效設(shè)計(jì)資料進(jìn)行方差分析．p＜0．05時(shí)認(rèn)為差異有顯著性．

2結(jié)果與分析

2．1一般狀況實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠自由進(jìn)食和飲水，飲食與尿量均無異常、體重按計(jì)劃（1．3％～1．5％的增長(zhǎng)速度）增長(zhǎng)、毛色光滑亮澤、自主活動(dòng)無異常、零死亡．飼養(yǎng)房室溫控制在22℃～24℃，濕度35％～55％，遵循自然光日照時(shí)間（7：00～19：00）．

2．2各組大鼠心肌組織中AMPK表達(dá)圖1結(jié)果顯示β?actin為內(nèi)參蛋白表明各孔道蛋白上樣量基本相同．相對(duì)于同步對(duì)照組，中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（ME組）和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（HE組）AMPK含量表達(dá)升高．大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（HE組）升高較明顯．在真核細(xì)胞中AMPK是一種異源三聚體形式存在包括催化亞基α和調(diào)節(jié)亞基β﹑γ．α亞基含有一個(gè)N端激酶結(jié)構(gòu)域和一個(gè)C端結(jié)構(gòu)域，N端是催化核心部位，C端負(fù)責(zé)與β和γ亞基結(jié)合．C端還含有變構(gòu)結(jié)合位點(diǎn)，參與和AMP的結(jié)合．β亞基是一個(gè)腳手架結(jié)構(gòu)其N端負(fù)責(zé)AMPK與膜相互作用時(shí)的定位，中間部分為一段糖原結(jié)合結(jié)構(gòu)域（GBD）C端KIS和ASC分別與α和γ亞單位結(jié)合［6］，γ亞基包括核苷酸結(jié)合區(qū)［7］，心肌中α2活性遠(yuǎn)高于α1，大鼠大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)骨骼肌AMPK表達(dá)顯著增加，中等強(qiáng)度卻沒有增加［8］，研究發(fā)現(xiàn)：心肌在大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)中AMPK表達(dá)顯著增加，與骨骼肌表達(dá)一致；運(yùn)動(dòng)可能增加AMP量，而降低磷酸肌酸量［9］使AMPK容易變構(gòu)激活［10］，最近研究認(rèn)為單次中等強(qiáng)度的刺激骨骼肌AMPKα2活性增加明顯［11］．DavidL．Coven等發(fā)現(xiàn)大鼠單次運(yùn)動(dòng)，其骨骼肌AMPKα1和AMPKα2都隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度增加而增加，且AMPKα2增加更明顯［12］，在我們研究中心肌α2亞基在不同強(qiáng)度訓(xùn)練中表達(dá)與AMPK總量的表達(dá)基本一致．現(xiàn)有研究表明：在整個(gè)運(yùn)動(dòng)過程中，隨著心臟做功的增加，心肌收縮力，心率，血壓都在增加，這些都可能激活A(yù)MPK［13］，但心肌AMPK表達(dá)增加的具體機(jī)制還不太清楚，有待以后進(jìn)一步研究．

2．3AMPK在運(yùn)動(dòng)中作用圖2結(jié)果顯示與同步對(duì)照組相比，中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組AMPK1（ME組）呈升高趨勢(shì)，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（p＞0．05）而大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（HE組）與中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（ME組）相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（p＜0．05）圖3結(jié)果顯示：與同步對(duì)照組相比，中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（ME組）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（p＜0．05）而大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（HE組）與中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組（ME組）比呈升高趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（p＜0．05）心臟有著非常高的能量需求，24h所產(chǎn)生和消耗的能量（ATP）遠(yuǎn)高于其他臟器．心臟中的能量?jī)?chǔ)備非常低，一但ATP產(chǎn)生停止，則數(shù)秒內(nèi)心臟中的ATP供應(yīng)就會(huì)完全耗竭，所以AMPK作為能量代謝中心感受器和調(diào)節(jié)器的作用在心臟中顯得尤為重要，在缺血、缺氧、高血壓等刺激下，使心肌AMPK活化，促進(jìn)線粒體對(duì)脂肪酸攝取和氧化［14］，還能提高葡萄糖攝取和糖酵解．一方面可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和增生，細(xì)胞膜，線粒體再生及細(xì)胞凋亡和自噬盡管長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)中AMPK在脂肪酸氧化中起的作用還不確定，但是單次運(yùn)動(dòng)中AMPK可導(dǎo)致骨骼肌的丙二酰COA減少，脂肪酸氧化增加，另一方面AMPK通過減少細(xì)胞內(nèi)吞作用增加肌纖維膜上的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT4）數(shù)量，從而增加細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用．有利于提高運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)成績(jī)．運(yùn)動(dòng)員AMPK表達(dá)增高后，機(jī)體產(chǎn)能增加，可以提高運(yùn)動(dòng)水平，但AMPK的上下游信號(hào)通路需我們進(jìn)一步研究的．#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#

3結(jié)論

大鼠經(jīng)不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后，心肌組織中AMPK表達(dá)隨運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練強(qiáng)度的增加，呈現(xiàn)逐漸遞增趨勢(shì)，相對(duì)于低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，高強(qiáng)度訓(xùn)練對(duì)于大鼠心肌AMPK的影響更大．提示心肌AMPK表達(dá)對(duì)不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生適應(yīng)性改變．