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化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文1

【關(guān)鍵詞】 流動(dòng)注射分析；水質(zhì)監(jiān)測(cè)；應(yīng)用

1 流動(dòng)注射分析法概況

流動(dòng)注射分析技術(shù)（Flow Injection Analysis，F(xiàn)IA）是由丹麥技術(shù)大學(xué)的RUZICKA和HANSEN于1974年提出的。FIA是在物理不平衡以及化學(xué)不平衡條件下，進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析測(cè)量的一種微分析技術(shù)。該技術(shù)的突出特點(diǎn)在于其精度高、分析速度較快、適用范圍廣、節(jié)省試劑和試樣、設(shè)備比較簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、容易實(shí)現(xiàn)在線監(jiān)測(cè)。該法是實(shí)現(xiàn)溶液的自動(dòng)化分析的有效手段，很多的科研工作者也在不斷地推動(dòng)FIA法作為標(biāo)準(zhǔn)分析方法。

2 FIA的基本工作原理

FIA是把一定體積的液體試樣間歇性地注入到一個(gè)密閉的、運(yùn)動(dòng)著的、由適當(dāng)液體（水及反應(yīng)劑）組成的連續(xù)載液之中，利用載流液體井試樣推入反應(yīng)管道中，試樣以一定的流速度在反應(yīng)管道中向前運(yùn)動(dòng)，依靠對(duì)流作用和擴(kuò)散作用將試樣分散成為具有一定濃度梯度的試樣帶。在流動(dòng)過程中，試樣帶與載流中的某些化學(xué)組成發(fā)生反應(yīng)，生成可以被檢測(cè)的物質(zhì)，載流液體將這些物質(zhì)帶入到檢測(cè)器中并進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)記錄儀將連續(xù)地記錄下檢測(cè)器的響應(yīng)，從而進(jìn)行定量分析。

在使用FIA分析的過程中，所有的試樣都要通過分析通道，并按順序以完全相同的方式進(jìn)行分析處理，在這個(gè)過程中，每一種試樣的變化都完全相同。FIA化學(xué)反應(yīng)實(shí)際上是試樣在試劑中的分散，這個(gè)過程是在形成試樣帶濃度梯度的同時(shí)發(fā)生的。FIA的采樣和進(jìn)樣都是周期性嚴(yán)格重復(fù)的。

3 FIA在水質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用

3.1 FIA分光光度法 最早與FIA法聯(lián)用的是分光光度法，兩者結(jié)合形成了FIA分光光度法。該方法有效地提高了分光光度法的檢測(cè)能力以及分析效率，在氣體擴(kuò)散、溶劑萃取、膜滲析、離子交換以及停流技術(shù)等方面都取得了明顯效果。該法所使用的儀器設(shè)備較為簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單方便，能夠與信號(hào)處理系統(tǒng)很好地連接在一起，使用范圍較廣。趙云利用該法測(cè)定了廢水中揮發(fā)酚，測(cè)定結(jié)果較精確，且測(cè)定較迅速。FIA分光光度法采用N2將藥品間隔開，可以有效地防止各段樣品之間的混合，從而保證各段試樣到達(dá)理化平衡的時(shí)間均等，降低了樣品預(yù)處理和分析的難度，較大程度地提高了水質(zhì)監(jiān)測(cè)準(zhǔn)確度和精密度。

3.2 FIA電化學(xué)法 電化學(xué)分析法是儀器分析法的重要組成部分，主要是以電位、電導(dǎo)、電流以及電量等參數(shù)與試樣的組成成分及濃度之間的關(guān)系作為計(jì)量基礎(chǔ)進(jìn)行檢測(cè)。FIA和電化學(xué)法的聯(lián)合使用大大提高了電化學(xué)分析法的檢測(cè)靈敏度，并實(shí)現(xiàn)了水質(zhì)檢測(cè)技術(shù)的在線監(jiān)測(cè)。FIA電化學(xué)法操作簡(jiǎn)單、選擇性及重現(xiàn)性較好，實(shí)驗(yàn)儀器比較簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，電極壽命較長(zhǎng)，使用范圍較廣，可用于檢測(cè)水質(zhì)中的Pb+及Ca2+等。

3.3 FIA化學(xué)發(fā)光法 化學(xué)發(fā)光（CL）法主要通過測(cè)量物質(zhì)在化學(xué)反應(yīng)過程中產(chǎn)生的光強(qiáng)度來對(duì)試樣進(jìn)行定量分析，其分析過程不需要任何的光源，靈敏度高，但持續(xù)時(shí)間較短，隨著時(shí)間的推移，其發(fā)光強(qiáng)度的變化較大。通過與FIA的聯(lián)合使用，精確度、靈敏度以及線性范圍都較常規(guī)的化學(xué)發(fā)光法有了較大的改善，是目前應(yīng)用較廣的痕量分析法。該方法的儀器設(shè)備較為簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，適用于井水、河水以及自來水中痕量鐵的測(cè)定。

3.4 FIA原子吸收法 FIA與原子吸收法（AAS）的聯(lián)合使用可以大大減低試劑的用量，并且在進(jìn)樣前對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，可有效地提高測(cè)量方法的靈敏度和選擇性，應(yīng)用較為廣泛。FIA-AAS法不僅可以檢測(cè)多種元素，還實(shí)現(xiàn)了對(duì)試樣的自動(dòng)化分析及形態(tài)分析。圖2為利用FIA-AAS測(cè)定金屬離子的單FIA流路系統(tǒng)示意圖。

4 FIA的發(fā)展趨勢(shì)

FIA技術(shù)的使用范圍較廣、靈敏度高、測(cè)定快速且結(jié)果準(zhǔn)確，通過與多種檢測(cè)方法聯(lián)合使用可大大提高其靈敏度和準(zhǔn)確度。隨著FIA與化學(xué)計(jì)量學(xué)以及計(jì)算機(jī)在線測(cè)控技術(shù)等的結(jié)合，F(xiàn)IA正向著簡(jiǎn)單化、微型化及智能化的方向發(fā)展。未來的FIA將成為常規(guī)的分析測(cè)試手段，并將廣泛運(yùn)用到實(shí)驗(yàn)室以及工業(yè)生產(chǎn)中，從而更好地為生產(chǎn)和科研服務(wù)。

化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文2

關(guān)鍵詞：石化產(chǎn)品 痕量硫化物 測(cè)定 分析

石化產(chǎn)品中殘留過量的硫，除了對(duì)煉油設(shè)備、運(yùn)輸設(shè)備造成腐蝕外，還會(huì)加速油品質(zhì)變質(zhì)，且燃燒后造成的二氧化硫會(huì)嚴(yán)重污染大氣環(huán)境。由此可見，強(qiáng)化石化產(chǎn)品中硫含量的控制，對(duì)其今后的使用有著極其重要的作用。就此，本文從石油產(chǎn)品中痕量硫化物含量測(cè)定原理、石油產(chǎn)品中痕量硫化物含量測(cè)定方法及石油產(chǎn)品中痕量硫測(cè)定方法的選擇等三個(gè)方面出發(fā)進(jìn)行分析。

一.石油產(chǎn)品中痕量硫化物含量測(cè)定原理

作為石化產(chǎn)品中嚴(yán)格控制的指標(biāo)之一，硫含量的測(cè)定、分析發(fā)揮著不可替代的作用。在痕量硫測(cè)定中，所測(cè)定的對(duì)象由原油與成品油、硫回收過程氣體及工業(yè)爐煙、大氣等三個(gè)方面組成。

在當(dāng)前石化產(chǎn)品的生產(chǎn)制造中，硫含量作為衡量原油及其產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，是整個(gè)石化產(chǎn)品分析內(nèi)容的重要組成部分。受原油來源及加工方式的影響，其含有的硫可以是元素硫、硫化氫、硫醇類、硫醚類、二硫化物及其同系物等。硫在油品中的存在，一方面會(huì)對(duì)煉油裝置及油品運(yùn)輸設(shè)備產(chǎn)生腐蝕，影響油品的安定性，另一方面煉廠及石化裝置排放氣中的硫化氫、燃?xì)鈾C(jī)及鍋爐排放的二氧化硫可污染大氣，造成中毒事故。但在某些狀況下，硫的存在也有著一定優(yōu)勢(shì)，如在改善油的性質(zhì)中，需要加入適量的非活性含硫化合物，這些都對(duì)實(shí)話產(chǎn)品中硫含量的測(cè)定有著嚴(yán)格的要求。

二.石油產(chǎn)品中痕量硫化物含量測(cè)定方法

（一）庫(kù)侖滴定測(cè)定法

庫(kù)侖滴定法也叫庫(kù)化法，常用語(yǔ)輕質(zhì)石油產(chǎn)品、原油及渣油中的總硫分析，其測(cè)量范圍約在百分之幾道千萬分之幾。在其使用中，國(guó)內(nèi)的庫(kù)倫儀研制及生產(chǎn)已經(jīng)具備相當(dāng)高的水平，再加上成本低廉，在很大程度上取代了以往的管式爐法與燈法，成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)石化產(chǎn)品硫含量分析的主要方法。

庫(kù)侖滴定的基本原理為將油品中的含硫化合物，在高溫含氧氣流中轉(zhuǎn)變成二氧化硫，并在氣流的引導(dǎo)下進(jìn)入滴定池中，通過滴定池含有K1電解液生成三碘離子與進(jìn)入滴定池的二氧化硫等當(dāng)量反應(yīng)，生成三氧化硫和1-，通過計(jì)算產(chǎn)生三碘離子所消耗的電量，便可計(jì)算樣品中的硫含量。

（二）XRF——X射線熒光法

XRF測(cè)定法在使用中，能夠?qū)Χ喾N油品中的硫、鎂等輕元素及鐵、鈷、鎳、鈾等重元素進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)也適用于液體、固體、泥漿及粉末等樣品測(cè)定。XRF作為一種非接觸的無損測(cè)量方法，在適用中可以對(duì)樣品進(jìn)行直接測(cè)量，且測(cè)量過后的試樣不會(huì)發(fā)生變化，測(cè)量誤差比較小。

XRF法在近幾年的適用中，憑借其操作簡(jiǎn)單、成本低廉已成為石化生產(chǎn)中常見的油品元素分析方法。XRF檢測(cè)原理：用X射線源照射試盤內(nèi)放好的試樣，使用檢測(cè)元件來感測(cè)這些X射線的強(qiáng)度，通過X射線的強(qiáng)度來識(shí)別硫元素，信號(hào)越強(qiáng)，則硫含量越多，信號(hào)越弱，則硫含量越少。

（三）醋酸鉛法

醋酸鉛硫分析法最初常用于大氣H2S含量的檢測(cè)，約在80年代，測(cè)量液態(tài)碳?xì)浠衔锏脑诰€總硫量系統(tǒng)才得以推出使用。在當(dāng)前使用的在線總硫量系統(tǒng)中，仍以Houston Atlas 公司生產(chǎn)的VII型總硫分析儀為主，且該分析儀除了具備獨(dú)特靈活的微處理體統(tǒng)外，在測(cè)量過程中不受外界環(huán)境的影響。VII型總硫分析儀在對(duì)氣體硫含量進(jìn)行測(cè)量時(shí)，其最小量程為0——1μL/L，其檢測(cè)原理為：將大量的H2與檢測(cè)樣品混合，在經(jīng)過一臺(tái)加氫反應(yīng)器后，H2與樣品會(huì)在高溫條件下發(fā)生還原反應(yīng)，并生成H2S，接著H2S與醋酸鉛接觸發(fā)生如下反應(yīng)：

在經(jīng)過一段時(shí)間的反應(yīng)后，白色的帶子上會(huì)留下棕黑色的硫化鉛，測(cè)定人員這時(shí)應(yīng)使用電光二極管及LED光源，通過極其靈敏的光線來測(cè)量顏色變化的速率，進(jìn)而測(cè)得H2S的具體含量。但在實(shí)際使用中，針對(duì)高芳烴含量樣品的硫含量測(cè)量，測(cè)量人員可以使用氧化還原的方法對(duì)硫含量進(jìn)行還原，即通過氧化還原的方式，先將樣品中的硫氧化為二氧化硫或三氧化硫，接著將其還原為H2S，最后通過醋酸鉛進(jìn)行含量檢測(cè)。

（四）其他檢測(cè)方法

在上述的三種檢測(cè)方法中，醋酸鉛檢測(cè)方法常用語(yǔ)也太是有產(chǎn)品中硫含量的分析檢測(cè)，但從其實(shí)質(zhì)來講，其更適用于檢測(cè)氣體硫含量，且成為檢測(cè)氣體硫含量的標(biāo)準(zhǔn)方法之一；X射線熒光法常用于液態(tài)石油產(chǎn)品中硫含量的測(cè)定，然而在使用過錯(cuò)中容易受自身低靈敏度的影響，檢測(cè)結(jié)果存在較大誤差；火焰光度計(jì)與氣相色譜技術(shù)結(jié)合也可以精確地在線測(cè)量硫含量，但由于光度計(jì)的非當(dāng)量化響應(yīng)和對(duì)碳?xì)浠衔镉绊懙拿舾卸龋荒茏鰡我缓蚧衔锝M分的分析，難以做總硫分析，因而其應(yīng)用受到限制。

隨著近幾年科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，我國(guó)科研人員研制出了化學(xué)發(fā)光法總硫檢測(cè)儀，并將其應(yīng)用到在線自動(dòng)檢測(cè)液態(tài)樣品中硫化合物的含量檢測(cè)中。該檢測(cè)技術(shù)在做氣相單一硫化物含量分析時(shí)就已經(jīng)證明其精度在很大程度上虞色譜技術(shù)不分上下，且該技術(shù)經(jīng)過改造后，在原有的基礎(chǔ)上增加了一個(gè)整體式加熱噴射閥，這樣便能將液態(tài)樣品直接噴入檢測(cè)器，在實(shí)現(xiàn)所有含硫化合物檢測(cè)的同時(shí)，還能直接得出產(chǎn)品中的總含硫量。

三.石油產(chǎn)品中痕量硫測(cè)定方法的選擇

就石化產(chǎn)品來講，其種類十分眾多，除了包括燃料產(chǎn)品及液化產(chǎn)品外，還包括一些劑產(chǎn)品等化工原料，針對(duì)這些不同種類的石油產(chǎn)品，在檢測(cè)其硫含量時(shí)，所用的測(cè)定方法也不相同。再加上石油產(chǎn)品中含硫量的不同，又可將石化產(chǎn)品分為高硫石油產(chǎn)品、低硫石油產(chǎn)品及痕量硫石油產(chǎn)品三個(gè)種類，再加上不同石油產(chǎn)品含硫量測(cè)定方法對(duì)硫的檢出限有所不同，因而在很大程度上，不同的含硫量石油產(chǎn)品在檢測(cè)中會(huì)出現(xiàn)與之相符的差異性。此外，在痕量硫測(cè)定方法的選擇上，還應(yīng)將檢測(cè)的工作效率及測(cè)試成本充分的考慮進(jìn)去，在保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確無誤的同時(shí)，還能將成本降到最低。

在對(duì)石化產(chǎn)品痕量硫化物進(jìn)行測(cè)定時(shí)，需要結(jié)合著石油產(chǎn)品的實(shí)際狀況選擇與之相對(duì)的檢測(cè)方式，這就要求測(cè)定人員在開展工作時(shí)：首先，結(jié)合著所選樣品的實(shí)際狀況，準(zhǔn)確掌握其基本性質(zhì)，結(jié)合著樣品所產(chǎn)生的工藝分析，對(duì)硫分的形態(tài)及含量范圍進(jìn)行確定；其次結(jié)合著石油產(chǎn)品硫含量的測(cè)定目的、結(jié)果集用途，選擇適用范圍內(nèi)更為經(jīng)濟(jì)、高效、準(zhǔn)確的測(cè)試方式。最后，在測(cè)量中，應(yīng)將誤差控制在一定范圍內(nèi)，確保測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性與高效性。

總 結(jié)：

綜上所述，石化產(chǎn)品在我國(guó)社會(huì)發(fā)展中有著極其重要的作用，科學(xué)、準(zhǔn)確的對(duì)測(cè)定石化產(chǎn)品痕量硫化物的含量，在實(shí)現(xiàn)石化產(chǎn)品最大經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，還能大大降低其對(duì)環(huán)境造成的污染程度，符合社會(huì)的環(huán)保需求。

參考文獻(xiàn)：

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化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文3

【關(guān)鍵詞】HIV病毒；分子生物學(xué)檢測(cè)；進(jìn)展

艾滋病病毒（HIV）主要侵襲人體免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致人體免疫缺陷發(fā)生多種感染疾病或腫瘤。艾滋病的不可治愈及其快速傳播使患者不斷增多，2012年全球感染總?cè)藬?shù)已達(dá)3900萬人，中國(guó)近半艾滋病病毒感染者尚未發(fā)現(xiàn)，為了防止艾滋病的大規(guī)模流行，艾滋病的檢測(cè)工作越發(fā)重要。目前篩查的免疫學(xué)方法，由于靈敏度低，漏檢窗口期和新近感染病毒的感染者，而以核酸檢測(cè)為代表的分子生物學(xué)技術(shù)，靈敏度和特異性均顯著提高，明顯縮短檢出病原體的窗口期，是HIV診斷方法和診斷試劑持續(xù)發(fā)展的主要方向，對(duì)遏制艾滋病的傳播蔓延有重要意義。

1 HIV生物學(xué)特性

HIV呈圓形或橢圓形，直徑900～140nm，外層為類脂包膜，成分是外膜糖蛋白（gp120）和跨膜糖蛋白（gp41），核心由RNA逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA多聚酶和結(jié)構(gòu)蛋白等組成，基因組除了具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)——基因長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR）、核心蛋白（gag）、聚合蛋白（po1）、包膜蛋白（env）gF，還有非常復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制，包括tat、rev、nef、vif、vpr、vpu等調(diào)節(jié)基因，其作用是在轉(zhuǎn)錄、翻譯、裝配等各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)病毒的生長(zhǎng)和繁殖起調(diào)節(jié)作用。HIV基因組中存在3個(gè)gag-pol- env.Gag基因編碼的核心蛋白均位于病毒的核酸蛋白體上，P17位于白與殼層之間的基質(zhì)上，包被于包膜蛋白的內(nèi)部。核衣殼包被于內(nèi)部核酸的，由主要的P24和P40及P55組成，其結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，是HIV-1型的特異性蛋白。Env編碼包膜蛋白即gp120和gp41，起協(xié)助HIV進(jìn)入宿主細(xì)胞的作用。聚合酶蛋白包括P66、P51和P31，它位于病毒的核區(qū)內(nèi)，并與病毒核酸緊密相關(guān)[1]。

根據(jù)env基因V3段堿基排列的不同，HIV-1分為11個(gè)亞型即A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、M和0亞型，HIV-2分為6個(gè)亞型[2]，不同國(guó)家和地區(qū)有相對(duì)優(yōu)勢(shì)亞型，HIV亞型在流行病學(xué)、診斷、臨床、試劑選擇、藥物篩選和疫苗研制上有著重要意義。

2 HIV-1的感染機(jī)制及感染標(biāo)志

病毒侵入人體后，通過病毒表面gpl20在化學(xué)因子CCR5或CXCR4幫助下與細(xì)胞表面受體CD4分子結(jié)合，然后在gp41的協(xié)助下HIV的膜與CD4+細(xì)胞的細(xì)胞膜相融合，病毒核心蛋白及RNA進(jìn)入胞漿。兩條RNA+在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下成DNA-，在DNA多聚酶的作用下復(fù)制DNA，此DNA部分存留在胞漿內(nèi)產(chǎn)生系列變化，然后在細(xì)胞膜上裝配成新病毒，再感染其它細(xì)胞。HIV感染后，首先能夠監(jiān)測(cè)到病毒RNA，其次是p24抗原，最后是抗體[3]。

3 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

隨著分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)快速發(fā)展，HIV RNA或DNA檢測(cè)得到應(yīng)用，核酸檢測(cè)已是艾滋病實(shí)驗(yàn)室診斷的主要發(fā)展方向[4]，在HIV感染的監(jiān)測(cè)、診斷、研究、療效觀察及預(yù)后判斷等方面均發(fā)揮著越來越大的作用，主要有定性和定量?jī)深悺?/p>

3.2 定性檢測(cè)

3.2.1 原位雜交（insite hydzmion）

應(yīng)用特定的標(biāo)記探針以分子雜交法直接檢測(cè)標(biāo)本中的HIV病毒靶核酸，起初標(biāo)記探針是放射性標(biāo)記，后來逐漸發(fā)展為酶標(biāo)記或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記等等。原位雜交的陽(yáng)性率比聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）略低，隨著核酸擴(kuò)增技術(shù)的出現(xiàn)并廣泛使用，基因探針技術(shù)也就逐漸失去應(yīng)用意義。

3.2.2 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）

PCR是一種以核酸生物學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)診斷技術(shù)。基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性—退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。患者感染HIV 1～14d后血漿中能檢測(cè)出HIV RNA，可用于急性感染期患者、抗體檢測(cè)不確定等情況的輔助診斷或用于血液篩查，尤其在HIV陽(yáng)性母親產(chǎn)下的嬰兒是否感染HIV的診斷中有著非常重要的意義，前病毒DNA PCR檢測(cè)法對(duì)出生48h內(nèi)的嬰兒檢測(cè)敏感性為38%，出生14d的嬰兒檢測(cè)敏感性達(dá)93%[5]。

3.2.3 逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR）

RT-PCR技術(shù)通過對(duì)RNA逆轉(zhuǎn)錄酶的應(yīng)用實(shí)現(xiàn)，即將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄DNA，接著進(jìn)行PCR，指數(shù)擴(kuò)增DN段，將放大產(chǎn)物變性并與多孔板結(jié)合，利用酶聯(lián)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。RT-PCR技術(shù)可在2h內(nèi)擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到凝膠電泳或?qū)崟r(shí)熒光法可檢測(cè)的水平，準(zhǔn)確定量的RT-PCR方法已被許多商業(yè)實(shí)驗(yàn)室證實(shí)，目前多種改良的快速RT-PCR檢測(cè)方法應(yīng)用于HIV的快速臨床診斷[6，7]。

PCR靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，但易污染出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；此外，HIV基因的多樣性，尚無一套引物能夠覆蓋所有的HIV序列，限制了檢測(cè)敏感性，因此，陽(yáng)性結(jié)果還須核酸序列測(cè)定加以確認(rèn)。HIV核酸定性檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果可作為HIV 抗體窗口期的早期診斷的輔助指標(biāo)，但不能單獨(dú)用于HIV感染的確診，成為限制PCR對(duì)于HIV感染診斷的臨床應(yīng)用。

3.3 定量檢測(cè)

HIV核酸定量檢測(cè)即病毒載量測(cè)定，感染HIV后病情發(fā)展速度直接與血漿中病毒載量呈正比。在其他血清學(xué)和病毒學(xué)標(biāo)志出現(xiàn)前檢出病毒核酸，使窗口期縮短6～11.5d，且慢性潛伏期也能檢出，便于早期輔助診斷；HIV病毒載量常用于用于評(píng)估疾病病程、監(jiān)測(cè)抗病毒治療成效、選擇抗病毒治療方案；還可用于鑒定出生后18個(gè)月內(nèi)的嬰兒血液中的HIV-IgG抗體是否來自于母體，嬰兒是否感染HIV（母嬰診斷）。當(dāng)前，常用的定量檢測(cè)方法有較高的敏感性、特異性和可重復(fù)性。

3.3.1 分支DNA信號(hào)擴(kuò)大系統(tǒng)（bDNA）

bDNA是指人工合成帶有側(cè)鏈的DN段標(biāo)記被激發(fā)的標(biāo)記物，利用發(fā)光強(qiáng)度與樣品中HIV RNA含量成比例，可通過發(fā)光強(qiáng)度來定量檢測(cè)血漿中HIV-1型RNA的一種方法。bDNA作為一種定量核酸檢測(cè)方法具有對(duì)檢測(cè)靶序列變異的更強(qiáng)識(shí)別能力，目前發(fā)展到靈敏度更好的、具有靶序列放大系統(tǒng)的第三代bDNA有數(shù)十個(gè)覆蓋整個(gè)基因組的探針，不僅可用于檢測(cè)HIV感染，可以方便地檢測(cè)HIV的部分變異株，且可用于療效觀察，文獻(xiàn)報(bào)道其為一種高靈敏度及特異性的方法[8，9]。與PCR相比bDNA不存在擴(kuò)增物的交叉污染，但靈敏度不如PCR，提高bDNA的靈敏度仍是難點(diǎn)[10]。

3.3.2 核酸序列依賴的擴(kuò)增系統(tǒng)（NASBA）

NASBA是以RT-PCR為基礎(chǔ)，由一對(duì)引物介導(dǎo)的、連續(xù)均一的、體外特異性核苷酸序列等溫?cái)U(kuò)增RNA的新技術(shù)，原理是提取病毒RNA，加入AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、核酸酶H（Rnase H）、T7RNA聚合酶和引物進(jìn)行擴(kuò)增。NASBA無需熱循環(huán)裝置，只在一個(gè)溫度下進(jìn)行（42℃），即可擴(kuò)增大量拷貝的RN段。對(duì)不同條件的實(shí)驗(yàn)室可以一次擴(kuò)增足量的RNA用于多次研究和直接使用肝素抗凝的血漿樣品，適合凍存血漿的回顧性分析。其高效擴(kuò)增的特性，能與多孔板酶介導(dǎo)的顯像技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)結(jié)合。因擴(kuò)增產(chǎn)物的不穩(wěn)定性特征，對(duì)傳染病病原的定性、定量檢測(cè)，減少了分子診斷實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。但操作較繁瑣，不便于大批量處理，且擴(kuò)增時(shí)退火溫度較低，容易引起污染，當(dāng)前，NASBA已應(yīng)用于HIV-1的分子診斷[10]。

3.3.3 轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增系統(tǒng)（TMA）

TMA技術(shù)原理與NASBA大致相同，差別是TMA利用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶及T7 RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶既有逆轉(zhuǎn)錄酶的活性又具有RNA酶H活性，反應(yīng)溫度為41.5℃，1h內(nèi)RNA模板擴(kuò)增約109倍。相比p24抗原檢測(cè)，TMA技術(shù)可縮短窗口期6 d，比HIV抗體檢測(cè)縮短14 d [11]。

3.3.4 連接酶酶促鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （LCR）

LCR法是基于靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴(kuò)增技術(shù)，原理是由兩段數(shù)l0個(gè)核苷酸組成的單鏈DNA探針與目標(biāo)序列雜交，將被檢測(cè)物中的特異性片段進(jìn)行擴(kuò)增，檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。LCR既可擴(kuò)增，又可檢測(cè)DNA突變，對(duì)已知突變類型的基因診斷是一個(gè)切實(shí)有效可行的方法，是隨PCR后一種較有發(fā)展前景的體外擴(kuò)增新技術(shù)。

3.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用使HIV核酸檢測(cè)技術(shù)又進(jìn)入到一個(gè)新境界。原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。一般使用TaqMan探針或Sybr Green熒光染料。但Sybr Green染料不能區(qū)別目的產(chǎn)物和非目的產(chǎn)物，使結(jié)果有偏差，目前廣泛使用的是TaqMan探針技術(shù)。熒光實(shí)時(shí)PCR則可以進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，改變了傳統(tǒng)的電泳終點(diǎn)檢測(cè)，得到相應(yīng)的S型擴(kuò)增曲線，其不但可以進(jìn)行定性檢測(cè)，更重要的是可以進(jìn)行定量檢測(cè)。與常規(guī)相比，具有特異性強(qiáng)、自動(dòng)化程度高、有效解決污染問題等特點(diǎn)，能夠檢測(cè)血漿中的病毒載量及血液中單個(gè)核細(xì)胞的前病毒載量。美國(guó)PE公司1996年發(fā)明TaqMan技術(shù)[12]，已廣泛應(yīng)用于基因檢測(cè)， 國(guó)內(nèi)2002年4月深圳匹基公司獲批準(zhǔn)第一個(gè)生產(chǎn)HIV熒光PCR檢測(cè)試劑盒，并應(yīng)用于臨床診斷，國(guó)產(chǎn)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑檢測(cè)HIV-1血漿病毒載量與進(jìn)口試劑相比具有較好的相關(guān)性[13]，并具有價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，已在臨床逐步推廣應(yīng)用。

3.3.6 PCR-ELISA

PCR-ELISA技術(shù)是PCR擴(kuò)增以后，在微孔板上借用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的原理，使用酶標(biāo)抗體，進(jìn)行固相雜交來實(shí)現(xiàn)定量。該技術(shù)是一種具有很高靈敏度和特異性的方法[14]，但ELISA是一個(gè)開放性的反應(yīng)，擴(kuò)增后進(jìn)行ELISA反應(yīng)，容易產(chǎn)生污染引起假陽(yáng)性，同時(shí)操作過程較繁瑣，臨床上難以廣泛應(yīng)用。

3.3.7 基因芯片技術(shù)

是PCR技術(shù)與核酸分子雜交相結(jié)合，通過對(duì)HIV基因組分析，將該病毒的高度保守序列作為鑒定指標(biāo)，可直接對(duì)病毒病原體進(jìn)行檢測(cè)，顯著提高了診斷的準(zhǔn)確性。1996年，Kozal等[15]研制出一種DNA芯片，對(duì)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶及蛋白酶的基因突變進(jìn)行篩選，并跟蹤監(jiān)測(cè)HIV拮抗藥物的產(chǎn)生和突變、疾病相關(guān)基因型以及患者在治療中的反應(yīng)。1998年，Hauser等[16]應(yīng)用DNA芯片技術(shù)在艾滋病患者出現(xiàn)抗體反應(yīng)前檢測(cè)HIV，對(duì)艾滋病的早期診斷有十分重要的意義。Affy-nletrix公司和Roche Mo1ecular公司合作生產(chǎn)的新一代診斷試劑盒，利用RMS實(shí)驗(yàn)室的PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA芯片技術(shù)結(jié)合檢測(cè)艾滋病患者的HIV耐藥反應(yīng)。HIV PRT440也已廣泛用于HIV-l病毒的測(cè)序、分型及多態(tài)性分析[17] 。基因表達(dá)譜研究可以高通量在檢測(cè)基因表達(dá)信息[18]。國(guó)內(nèi)也有文獻(xiàn)報(bào)道采用基因芯片檢測(cè)HIV[19，20] 。由此可見，基因芯片在鑒定HIV感染中具有其他方法無可比擬的優(yōu)越性。

盡管基因芯片技術(shù)需要進(jìn)一步的不斷完善，但完全可以預(yù)計(jì)在不久的將來其應(yīng)用前景會(huì)錦上添花。不單限于HIV的耐藥性檢測(cè)和基因診斷，可以讓許多感染性疾病病原體的基因集中在一張芯片上，同時(shí)對(duì)其進(jìn)行感染診斷。

總之，分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)有助于HIV感染者的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，也有助于對(duì)治療艾滋病藥物的療效評(píng)價(jià)、預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)程，減少艾滋病對(duì)個(gè)人、家庭及社會(huì)的危害。隨著HIV分子生物學(xué)技術(shù)在高特異性、高敏感性、快速、自動(dòng)化等方面的不斷進(jìn)步，HIV分子診斷可望成為艾滋病診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，并通過對(duì)HIV突變及個(gè)體遺傳差異的檢測(cè)指導(dǎo)抗病毒治療，為人類遏止艾滋病的流行發(fā)揮重要的作用。

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艾滋病病毒（HIV）主要侵襲人體免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致人體免疫缺陷發(fā)生多種感染疾病或腫瘤。艾滋病的不可治愈及其快速傳播使患者不斷增多，2012年全球感染總?cè)藬?shù)已達(dá)3900萬人，中國(guó)近半艾滋病病毒感染者尚未發(fā)現(xiàn)，為了防止艾滋病的大規(guī)模流行，艾滋病的檢測(cè)工作越發(fā)重要。目前篩查的免疫學(xué)方法，由于靈敏度低，漏檢窗口期和新近感染病毒的感染者，而以核酸檢測(cè)為代表的分子生物學(xué)技術(shù)，靈敏度和特異性均顯著提高，明顯縮短檢出病原體的窗口期，是HIV診斷方法和診斷試劑持續(xù)發(fā)展的主要方向，對(duì)遏制艾滋病的傳播蔓延有重要意義。

1 HIV生物學(xué)特性

HIV呈圓形或橢圓形，直徑900～140nm，外層為類脂包膜，成分是外膜糖蛋白（gp120）和跨膜糖蛋白（gp41），核心由RNA逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA多聚酶和結(jié)構(gòu)蛋白等組成，基因組除了具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)——基因長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR）、核心蛋白（gag）、聚合蛋白（po1）、包膜蛋白（env）gF，還有非常復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制，包括tat、rev、nef、vif、vpr、vpu等調(diào)節(jié)基因，其作用是在轉(zhuǎn)錄、翻譯、裝配等各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)病毒的生長(zhǎng)和繁殖起調(diào)節(jié)作用。HIV基因組中存在3個(gè)gag-pol- env.Gag基因編碼的核心蛋白均位于病毒的核酸蛋白體上，P17位于白與殼層之間的基質(zhì)上，包被于包膜蛋白的內(nèi)部。核衣殼包被于內(nèi)部核酸的，由主要的P24和P40及P55組成，其結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，是HIV-1型的特異性蛋白。Env編碼包膜蛋白即gp120和gp41，起協(xié)助HIV進(jìn)入宿主細(xì)胞的作用。聚合酶蛋白包括P66、P51和P31，它位于病毒的核區(qū)內(nèi)，并與病毒核酸緊密相關(guān)[1]。

根據(jù)env基因V3段堿基排列的不同，HIV-1分為11個(gè)亞型即A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、M和0亞型，HIV-2分為6個(gè)亞型[2]，不同國(guó)家和地區(qū)有相對(duì)優(yōu)勢(shì)亞型，HIV亞型在流行病學(xué)、診斷、臨床、試劑選擇、藥物篩選和疫苗研制上有著重要意義。

2 HIV-1的感染機(jī)制及感染標(biāo)志

病毒侵入人體后，通過病毒表面gpl20在化學(xué)因子CCR5或CXCR4幫助下與細(xì)胞表面受體CD4分子結(jié)合，然后在gp41的協(xié)助下HIV的膜與CD4+細(xì)胞的細(xì)胞膜相融合，病毒核心蛋白及RNA進(jìn)入胞漿。兩條RNA+在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下成DNA-，在DNA多聚酶的作用下復(fù)制DNA，此DNA部分存留在胞漿內(nèi)產(chǎn)生系列變化，然后在細(xì)胞膜上裝配成新病毒，再感染其它細(xì)胞。HIV感染后，首先能夠監(jiān)測(cè)到病毒RNA，其次是p24抗原，最后是抗體[3]。

3 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

隨著分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)快速發(fā)展，HIV RNA或DNA檢測(cè)得到應(yīng)用，核酸檢測(cè)已是艾滋病實(shí)驗(yàn)室診斷的主要發(fā)展方向[4]，在HIV感染的監(jiān)測(cè)、診斷、研究、療效觀察及預(yù)后判斷等方面均發(fā)揮著越來越大的作用，主要有定性和定量?jī)深悺?/p>

3.2 定性檢測(cè)

3.2.1 原位雜交（insite hydzmion）

應(yīng)用特定的標(biāo)記探針以分子雜交法直接檢測(cè)標(biāo)本中的HIV病毒靶核酸，起初標(biāo)記探針是放射性標(biāo)記，后來逐漸發(fā)展為酶標(biāo)記或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記等等。原位雜交的陽(yáng)性率比聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）略低，隨著核酸擴(kuò)增技術(shù)的出現(xiàn)并廣泛使用，基因探針技術(shù)也就逐漸失去應(yīng)用意義。

3.2.2 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）

PCR是一種以核酸生物學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)診斷技術(shù)。基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性—退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。患者感染HIV 1～14d后血漿中能檢測(cè)出HIV RNA，可用于急性感染期患者、抗體檢測(cè)不確定等情況的輔助診斷或用于血液篩查，尤其在HIV陽(yáng)性母親產(chǎn)下的嬰兒是否感染HIV的診斷中有著非常重要的意義，前病毒DNA PCR檢測(cè)法對(duì)出生48h內(nèi)的嬰兒檢測(cè)敏感性為38%，出生14d的嬰兒檢測(cè)敏感性達(dá)93%[5]。

3.2.3 逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR）

RT-PCR技術(shù)通過對(duì)RNA逆轉(zhuǎn)錄酶的應(yīng)用實(shí)現(xiàn)，即將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄DNA，接著進(jìn)行PCR，指數(shù)擴(kuò)增DN段，將放大產(chǎn)物變性并與多孔板結(jié)合，利用酶聯(lián)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。RT-PCR技術(shù)可在2h內(nèi)擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到凝膠電泳或?qū)崟r(shí)熒光法可檢測(cè)的水平，準(zhǔn)確定量的RT-PCR方法已被許多商業(yè)實(shí)驗(yàn)室證實(shí)，目前多種改良的快速RT-PCR檢測(cè)方法應(yīng)用于HIV的快速臨床診斷[6，7]。

PCR靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，但易污染出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；此外，HIV基因的多樣性，尚無一套引物能夠覆蓋所有的HIV序列，限制了檢測(cè)敏感性，因此，陽(yáng)性結(jié)果還須核酸序列測(cè)定加以確認(rèn)。HIV核酸定性檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果可作為HIV 抗體窗口期的早期診斷的輔助指標(biāo)，但不能單獨(dú)用于HIV感染的確診，成為限制PCR對(duì)于HIV感染診斷的臨床應(yīng)用。

3.3 定量檢測(cè)

HIV核酸定量檢測(cè)即病毒載量測(cè)定，感染HIV后病情發(fā)展速度直接與血漿中病毒載量呈正比。在其他血清學(xué)和病毒學(xué)標(biāo)志出現(xiàn)前檢出病毒核酸，使窗口期縮短6～11.5d，且慢性潛伏期也能檢出，便于早期輔助診斷；HIV病毒載量常用于用于評(píng)估疾病病程、監(jiān)測(cè)抗病毒治療成效、選擇抗病毒治療方案；還可用于鑒定出生后18個(gè)月內(nèi)的嬰兒血液中的HIV-IgG抗體是否來自于母體，嬰兒是否感染HIV（母嬰診斷）。當(dāng)前，常用的定量檢測(cè)方法有較高的敏感性、特異性和可重復(fù)性。

3.3.1 分支DNA信號(hào)擴(kuò)大系統(tǒng)（bDNA）

bDNA是指人工合成帶有側(cè)鏈的DN段標(biāo)記被激發(fā)的標(biāo)記物，利用發(fā)光強(qiáng)度與樣品中HIV RNA含量成比例，可通過發(fā)光強(qiáng)度來定量檢測(cè)血漿中HIV-1型RNA的一種方法。bDNA作為一種定量核酸檢測(cè)方法具有對(duì)檢測(cè)靶序列變異的更強(qiáng)識(shí)別能力，目前發(fā)展到靈敏度更好的、具有靶序列放大系統(tǒng)的第三代bDNA有數(shù)十個(gè)覆蓋整個(gè)基因組的探針，不僅可用于檢測(cè)HIV感染，可以方便地檢測(cè)HIV的部分變異株，且可用于療效觀察，文獻(xiàn)報(bào)道其為一種高靈敏度及特異性的方法[8，9]。與PCR相比bDNA不存在擴(kuò)增物的交叉污染，但靈敏度不如PCR，提高bDNA的靈敏度仍是難點(diǎn)[10]。

3.3.2 核酸序列依賴的擴(kuò)增系統(tǒng)（NASBA）

NASBA是以RT-PCR為基礎(chǔ)，由一對(duì)引物介導(dǎo)的、連續(xù)均一的、體外特異性核苷酸序列等溫?cái)U(kuò)增RNA的新技術(shù)，原理是提取病毒RNA，加入AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、核酸酶H（Rnase H）、T7RNA聚合酶和引物進(jìn)行擴(kuò)增。NASBA無需熱循環(huán)裝置，只在一個(gè)溫度下進(jìn)行（42℃），即可擴(kuò)增大量拷貝的RN段。對(duì)不同條件的實(shí)驗(yàn)室可以一次擴(kuò)增足量的RNA用于多次研究和直接使用肝素抗凝的血漿樣品，適合凍存血漿的回顧性分析。其高效擴(kuò)增的特性，能與多孔板酶介導(dǎo)的顯像技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)結(jié)合。因擴(kuò)增產(chǎn)物的不穩(wěn)定性特征，對(duì)傳染病病原的定性、定量檢測(cè)，減少了分子診斷實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。但操作較繁瑣，不便于大批量處理，且擴(kuò)增時(shí)退火溫度較低，容易引起污染，當(dāng)前，NASBA已應(yīng)用于HIV-1的分子診斷[10]。

3.3.3 轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增系統(tǒng)（TMA）

TMA技術(shù)原理與NASBA大致相同，差別是TMA利用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶及T7 RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶既有逆轉(zhuǎn)錄酶的活性又具有RNA酶H活性，反應(yīng)溫度為41.5℃，1h內(nèi)RNA模板擴(kuò)增約109倍。相比p24抗原檢測(cè)，TMA技術(shù)可縮短窗口期6 d，比HIV抗體檢測(cè)縮短14 d [11]。

3.3.4 連接酶酶促鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （LCR）

LCR法是基于靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴(kuò)增技術(shù)，原理是由兩段數(shù)l0個(gè)核苷酸組成的單鏈DNA探針與目標(biāo)序列雜交，將被檢測(cè)物中的特異性片段進(jìn)行擴(kuò)增，檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。LCR既可擴(kuò)增，又可檢測(cè)DNA突變，對(duì)已知突變類型的基因診斷是一個(gè)切實(shí)有效可行的方法，是隨PCR后一種較有發(fā)展前景的體外擴(kuò)增新技術(shù)。

3.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用使HIV核酸檢測(cè)技術(shù)又進(jìn)入到一個(gè)新境界。原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。一般使用TaqMan探針或Sybr Green熒光染料。但Sybr Green染料不能區(qū)別目的產(chǎn)物和非目的產(chǎn)物，使結(jié)果有偏差，目前廣泛使用的是TaqMan探針技術(shù)。熒光實(shí)時(shí)PCR則可以進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，改變了傳統(tǒng)的電泳終點(diǎn)檢測(cè)，得到相應(yīng)的S型擴(kuò)增曲線，其不但可以進(jìn)行定性檢測(cè)，更重要的是可以進(jìn)行定量檢測(cè)。與常規(guī)相比，具有特異性強(qiáng)、自動(dòng)化程度高、有效解決污染問題等特點(diǎn)，能夠檢測(cè)血漿中的病毒載量及血液中單個(gè)核細(xì)胞的前病毒載量。美國(guó)PE公司1996年發(fā)明TaqMan技術(shù)[12]，已廣泛應(yīng)用于基因檢測(cè)， 國(guó)內(nèi)2002年4月深圳匹基公司獲批準(zhǔn)第一個(gè)生產(chǎn)HIV熒光PCR檢測(cè)試劑盒，并應(yīng)用于臨床診斷，國(guó)產(chǎn)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑檢測(cè)HIV-1血漿病毒載量與進(jìn)口試劑相比具有較好的相關(guān)性[13]，并具有價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，已在臨床逐步推廣應(yīng)用。

3.3.6 PCR-ELISA

PCR-ELISA技術(shù)是PCR擴(kuò)增以后，在微孔板上借用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的原理，使用酶標(biāo)抗體，進(jìn)行固相雜交來實(shí)現(xiàn)定量。該技術(shù)是一種具有很高靈敏度和特異性的方法[14]，但ELISA是一個(gè)開放性的反應(yīng)，擴(kuò)增后進(jìn)行ELISA反應(yīng)，容易產(chǎn)生污染引起假陽(yáng)性，同時(shí)操作過程較繁瑣，臨床上難以廣泛應(yīng)用。

3.3.7 基因芯片技術(shù)

是PCR技術(shù)與核酸分子雜交相結(jié)合，通過對(duì)HIV基因組分析，將該病毒的高度保守序列作為鑒定指標(biāo)，可直接對(duì)病毒病原體進(jìn)行檢測(cè)，顯著提高了診斷的準(zhǔn)確性。1996年，Kozal等[15]研制出一種DNA芯片，對(duì)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶及蛋白酶的基因突變進(jìn)行篩選，并跟蹤監(jiān)測(cè)HIV拮抗藥物的產(chǎn)生和突變、疾病相關(guān)基因型以及患者在治療中的反應(yīng)。1998年，Hauser等[16]應(yīng)用DNA芯片技術(shù)在艾滋病患者出現(xiàn)抗體反應(yīng)前檢測(cè)HIV，對(duì)艾滋病的早期診斷有十分重要的意義。Affy-nletrix公司和Roche Mo1ecular公司合作生產(chǎn)的新一代診斷試劑盒，利用RMS實(shí)驗(yàn)室的PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA芯片技術(shù)結(jié)合檢測(cè)艾滋病患者的HIV耐藥反應(yīng)。HIV PRT440也已廣泛用于HIV-l病毒的測(cè)序、分型及多態(tài)性分析[17] 。基因表達(dá)譜研究可以高通量在檢測(cè)基因表達(dá)信息[18]。國(guó)內(nèi)也有文獻(xiàn)報(bào)道采用基因芯片檢測(cè)HIV[19，20] 。由此可見，基因芯片在鑒定HIV感染中具有其他方法無可比擬的優(yōu)越性。

盡管基因芯片技術(shù)需要進(jìn)一步的不斷完善，但完全可以預(yù)計(jì)在不久的將來其應(yīng)用前景會(huì)錦上添花。不單限于HIV的耐藥性檢測(cè)和基因診斷，可以讓許多感染性疾病病原體的基因集中在一張芯片上，同時(shí)對(duì)其進(jìn)行感染診斷。

總之，分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)有助于HIV感染者的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，也有助于對(duì)治療艾滋病藥物的療效評(píng)價(jià)、預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)程，減少艾滋病對(duì)個(gè)人、家庭及社會(huì)的危害。隨著HIV分子生物學(xué)技術(shù)在高特異性、高敏感性、快速、自動(dòng)化等方面的不斷進(jìn)步，HIV分子診斷可望成為艾滋病診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，并通過對(duì)HIV突變及個(gè)體遺傳差異的檢測(cè)指導(dǎo)抗病毒治療，為人類遏止艾滋病的流行發(fā)揮重要的作用。

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