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細(xì)胞器范文1

關(guān)鍵詞： 高中生物教學(xué) “細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器” 評優(yōu)課 反思

近期我有幸參加了一次我區(qū)高中生物優(yōu)質(zhì)課的評比活動(dòng)，課題是蘇教版必修一《分子與細(xì)胞》模塊中第三章第二節(jié)《細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞器》的內(nèi)容。這次評優(yōu)課我感覺參賽教師在教學(xué)理念上有很大的轉(zhuǎn)變。從教師的角度上，注重角色的轉(zhuǎn)變，利用自己的智慧組織教學(xué)，努力實(shí)現(xiàn)“教師是學(xué)生學(xué)習(xí)的促進(jìn)者、合作者、研究者”。對待學(xué)生，注重自主、合作、探究等多種學(xué)習(xí)方式的引導(dǎo)，使學(xué)生能夠主動(dòng)地獲取科學(xué)知識(shí)，體驗(yàn)科學(xué)過程與科學(xué)方法，理解科學(xué)本質(zhì)，實(shí)現(xiàn)三維目標(biāo)。當(dāng)然在執(zhí)教過程中，也凸顯一些問題，例如有些課堂教學(xué)僅是形式的改變，實(shí)質(zhì)上變化不大。通過對這次評優(yōu)課優(yōu)點(diǎn)與不足的反思，一是拓寬自己的教學(xué)思路，二是希望與同行交流在新課程理念下，如何利用多樣化教學(xué)形式，提高課堂教學(xué)的有效性，以及在組織教學(xué)時(shí)應(yīng)該怎樣避免課堂教學(xué)落實(shí)的形式化。

在抽取“細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器”這一課題時(shí)，教師大多感覺教學(xué)內(nèi)容多，在教學(xué)任務(wù)的完成上時(shí)間較緊。如果利用傳統(tǒng)的講授法，對每部分內(nèi)容逐一講解，學(xué)生就會(huì)掌握各細(xì)胞器結(jié)構(gòu)與功能。但用這種知識(shí)點(diǎn)直接呈現(xiàn)的方式，在一節(jié)課是無法完成教學(xué)任務(wù)的。更主要的是學(xué)生被動(dòng)接受知識(shí)，沒有體現(xiàn)主體地位。在實(shí)際教學(xué)中，參賽教師利用多樣形式，提高了課堂的有效性。

1.實(shí)現(xiàn)課堂教學(xué)設(shè)計(jì)多樣化，提高課堂教學(xué)的有效性。

各個(gè)細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)與功能是這節(jié)課的重點(diǎn)。在處理這部分內(nèi)容時(shí)，各位教師采用了不同的方法。有的借助多媒體教學(xué)直觀的特點(diǎn)，重點(diǎn)展示線粒體、葉綠體的亞顯微結(jié)構(gòu)。清晰的結(jié)構(gòu)，講到外膜、內(nèi)膜、基質(zhì)結(jié)構(gòu)時(shí)閃動(dòng)變換的色彩，激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，創(chuàng)設(shè)出一種“圖文并茂”的教學(xué)情境，使學(xué)生在一種輕松愉快的環(huán)境下感受知識(shí)，形成學(xué)習(xí)動(dòng)力；有的教師則采取以小組為單位合作學(xué)習(xí)的方式。具體的做法是把課前準(zhǔn)備的細(xì)胞器模型分發(fā)給每一小組，對照模型，小組內(nèi)合作探究教師提出的問題：是什么細(xì)胞器？形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是什么？功能是什么？在動(dòng)植物細(xì)胞內(nèi)的分布使怎樣的？有無膜結(jié)構(gòu)？在小組內(nèi)自主學(xué)習(xí)的基礎(chǔ)上，每一組選一名代表到講臺(tái)前給全班同學(xué)講解。有不完整的地方組內(nèi)成員可補(bǔ)充、完善，各小組間也可互相補(bǔ)充。在合作交流后教師再精講點(diǎn)撥。這種模式有利于學(xué)生與學(xué)生間的知識(shí)交流、情感交流。在學(xué)生講解與糾錯(cuò)的過程中，完善知識(shí)，在對話間增強(qiáng)了學(xué)生間的合作交流，培養(yǎng)了團(tuán)隊(duì)意識(shí)；有的教師把各個(gè)細(xì)胞器做成許多圖片，從不同的角度分類粘貼。例如雙層膜、單層膜、沒有膜的細(xì)胞器分別有哪些？動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)有哪些細(xì)胞器？植物細(xì)胞內(nèi)有哪些細(xì)胞器？含有色素的細(xì)胞器有哪些？與能量代謝有關(guān)的細(xì)胞器有哪些？運(yùn)用這種歸納的教學(xué)方法有利于學(xué)生對所學(xué)知識(shí)的比較總結(jié)，在剪貼過程中，思考總結(jié)深化了知識(shí)；更有的教師采用了情景劇的形式組織教學(xué)。以著名的小品《五官爭功》為藍(lán)本，演繹了細(xì)胞器的爭功。詼諧的表演，幽默的語言，課堂為他們提供了一個(gè)思維碰撞的舞臺(tái)，使學(xué)生真正成為了學(xué)習(xí)舞臺(tái)上的主人。學(xué)生在愉悅的氣氛中掌握了知識(shí)，教師也實(shí)現(xiàn)了自己的教學(xué)目標(biāo)。

2.促進(jìn)學(xué)生學(xué)習(xí)方式的多樣化，提高課堂教學(xué)的有效性。

新課程改革的重要內(nèi)容之一，是學(xué)生學(xué)習(xí)方式的變革。以問題串的形式引導(dǎo)學(xué)生自主學(xué)習(xí)；以小組為單位合作學(xué)習(xí)；創(chuàng)設(shè)問題情境的探究性學(xué)習(xí)等，在這次評優(yōu)課上都有所體驗(yàn)。多樣化的學(xué)習(xí)方式，一改以往學(xué)生被動(dòng)接受的學(xué)習(xí)地位，真正成為學(xué)習(xí)的主體，能積極主動(dòng)參與到學(xué)習(xí)任務(wù)中來。

3.注重習(xí)題形式的多樣化，提高課堂教學(xué)的有效性。

在鞏固知識(shí)這一環(huán)節(jié)中，參賽教師精選習(xí)題，采用多種形式增強(qiáng)練習(xí)效果。除了常見的選擇題、填空題外，有的教師應(yīng)用了判斷題。以小組為單位，進(jìn)行搶答。學(xué)生的熱情被充分地調(diào)動(dòng)起來，更重要的是把一些易混淆、易出錯(cuò)和一些學(xué)生搞不清楚的知識(shí)點(diǎn)以這種形式展示出來，這樣學(xué)生就有豁然開朗的感覺。例：（1）植物的所有細(xì)胞都有葉綠體；（2）線粒體是生物有氧呼吸的必要條件；（3）葉綠體基質(zhì)和線粒體基質(zhì)相同等說法的判斷。還有的教師把細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)圖與功能以連線的方式考查學(xué)生。這樣不僅使學(xué)生掌握每個(gè)細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)與其對應(yīng)的功能，在連線中也對相應(yīng)的細(xì)胞器進(jìn)行比較。例如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體形態(tài)上的比較，線粒體與葉綠體功能上的比較。

在本次活動(dòng)中也存在著不足，主要有以下幾點(diǎn)：一是有些合作學(xué)習(xí)的小組組建不合理，流于形式，表現(xiàn)在合作小組的組建比較單一。對教師要求探討的問題前后桌的學(xué)生以小組為單位進(jìn)行討論。沒有考慮學(xué)生層次、需求、能力，男女生性別的差異。這樣在討論時(shí)分工不明確，組與組學(xué)習(xí)能力的差異較大，因此在回答問題，展示學(xué)習(xí)成果時(shí)，基本上是個(gè)別小組壟斷了課堂。沒有達(dá)到面向全體學(xué)生的目的。二是評價(jià)形式單一。評價(jià)是合作學(xué)習(xí)中不可缺少的一個(gè)環(huán)節(jié)，合作學(xué)習(xí)應(yīng)以各集體的學(xué)習(xí)效果作為評價(jià)的依據(jù)，進(jìn)行組員自評、互評，小組自評、互評，教師評價(jià)。這樣有利于形成組內(nèi)成員合作，組間成員競爭的格局。而有些教師在評價(jià)時(shí)主要采取教師評價(jià)，給各個(gè)小組簡單的積分，沒有適時(shí)點(diǎn)評。這樣的評價(jià)基本沒有達(dá)到激勵(lì)的效果。

總之，在幾節(jié)同題異構(gòu)課中，雖然教學(xué)內(nèi)容，目標(biāo)統(tǒng)一，但不同的教師以不同的方式組織教學(xué)給予了很多啟示，教無定法，對一節(jié)內(nèi)容，我們可從不同的角度設(shè)計(jì)教學(xué)。但主旋律是在新課程理念下，真正提高課堂教學(xué)實(shí)效。

參考文獻(xiàn)：

［1］周初霞.凸現(xiàn)學(xué)生學(xué)習(xí)主體性的生物課堂教學(xué)案例探討.中學(xué)生物教學(xué)，2011，（6）：32-34.

細(xì)胞器范文2

基金項(xiàng)目：全軍醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究“十二五”發(fā)展計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（BWS12J018）；國家自然科學(xué)基金（81071529，81101467，81101406）

作者單位：510010 廣州，廣州總醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科 全軍熱區(qū)創(chuàng)傷救治與組織修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

通信作者：蘇磊，Email：

【摘要】目的 研究熱打擊對培養(yǎng)人骨骼肌細(xì)胞（HSKMC）通透性、細(xì)胞骨架及細(xì)胞周期影響。

訪法 流式細(xì)胞儀鈣離子內(nèi)流檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞膜通透性的影響，考馬斯亮藍(lán)R-250染色法檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞骨架影響，流式細(xì)胞儀檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞周期改變。結(jié)果 給予培養(yǎng)人HSKMC細(xì)胞不同溫度梯度熱打擊1 h后， 43 ℃熱打擊組鈣離子流式檢測的中位數(shù)為91.63，37 ℃對照組中位數(shù)為22.98。同對照組相比，隨著熱打擊程度加強(qiáng)，顯微鏡高倍鏡下可見骨骼肌細(xì)胞骨架逐漸出現(xiàn)變粗、變短、出現(xiàn)明顯的應(yīng)力纖維。骨骼肌細(xì)胞在熱打擊情況下，各組G0/G1期DNA含量在44.13～62.98之間，與正常對照組對比，當(dāng)細(xì)胞離開熱打擊環(huán)境后培養(yǎng)18 h前G0/G1期DNA含量明顯高于對照組，培養(yǎng)第18 小時(shí)恢復(fù)才同對照組基本相同。

結(jié)論 熱打擊的情況下造成細(xì)胞鈣離子內(nèi)流效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載?？筛淖僅SKMC骨架結(jié)構(gòu)，使骨架失去正常的網(wǎng)狀有序排列結(jié)構(gòu)，間隙增大。細(xì)胞周期出現(xiàn)阻滯，細(xì)胞被阻滯在G0/G1期。

【關(guān)鍵詞】熱打擊；骨骼肌細(xì)胞；通透性；鈣超載；細(xì)胞骨架；細(xì)胞周期；考馬斯亮藍(lán)染色；流式檢測

The effect of heat stress on the permeability， cytoskeleton and cell cycle of human skeletal muscle cellPan Zhiguo， Shao Yu， Wan Jun， Geng Yan， Chen Jinghe， Su Lei.ICU Department of Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command， Guangzhou 510010， China

Corresponding author：Su Lei， Email：

【Abstract】Objective To study the effect of heat stress on the permeability， cytoskeleton and cell cycle of human skeletal muscle cell （HSKMC）. Methods The HSKMC membrane permeability was detected by calcium ion inflow with flow cytometer， the cytoskeleton was stained by CBB 250， and the cell cycle was determined by flow cytometer.Results After 1 h of heat stress on human HSKMC cells under different temperature gradient， the median level of calcium ion was 91.63 in 43 ℃ heat stress group compared with 22.98 in 37 ℃control group. As temperature increased， thicker and shorter cytoskeleton and stress fiber were shown under the high power lens of microscope. The DNA expression of skeleton cells at G0/G1 stage was 44.13-62.98 in groups under heat stress. Compared with normal control group， DNA expression was much higher in heat stress group， when HSKMC was cultured under 37℃ temperature for another 18 h， it kept decreasing DNA expression to a similar level as control group.Conclusions Heat stress can cause calcium iron inflow resulting in intracellular calcium overload， and affect the cytoskeleton leading to loss of normal web ordered arrangement and increased gap in HSKMC cells， which give rise to blocking cell cycle into G0/G1 stage.

【Key words】Heat stress；Skeletal muscle cells；Permeability；Calcium overload；Cytoskeleton；Cell cycles；Coomassie brilliant blue； Coomassie brilliant blue；Flow cytometry

中暑的特征為中心體溫過高伴隨著系統(tǒng)炎癥反應(yīng)致多臟器功能障礙，患者中心體溫可超過40 ℃，導(dǎo)致機(jī)體主要臟器如心、肝、肺、腎、腸、血管和骨骼肌等發(fā)生一系列損傷[1-7]。中暑并發(fā)橫紋肌溶解癥的發(fā)病率約為25%[8]。骨骼肌占成人體質(zhì)量的40%～50%，骨骼肌細(xì)胞內(nèi)外的電解質(zhì)失衡、炎癥因子變化對整個(gè)機(jī)體的影響十分巨大。本課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)熱打擊對骨骼肌細(xì)胞具有細(xì)胞毒效應(yīng)，抑制骨骼肌細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的釋放，提出重癥中暑的“第二關(guān)鍵點(diǎn)”理論[9-10]。筆者在前期的研究中發(fā)現(xiàn)熱打擊是導(dǎo)致橫紋肌溶解的重要原因[11-12]，本實(shí)驗(yàn)擬通過研究在熱打擊條件下骨骼肌細(xì)胞的鈣離子內(nèi)流情況、細(xì)胞骨架改變和細(xì)胞周期變化情況，觀察熱打擊對于骨骼肌細(xì)胞的影響，進(jìn)一步研究骨骼肌在重癥中暑發(fā)生、發(fā)展中的作用和機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑

人骨骼肌細(xì)胞株（HSKMC）從中國科學(xué)院昆明細(xì)胞所購買。流式細(xì)胞儀購自BD公司，F(xiàn)luo-3 AM鈣離子熒光探針試劑盒購自invitrogen公司，Olympus熒光顯微鏡，細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒購自武漢碧云天公司。

1.2 方法

1.2.1 HSKMC細(xì)胞培養(yǎng) HSKMC細(xì)胞復(fù)蘇后，將細(xì)胞收入離心管中，1000 r/min離心10 min，棄上清，用高糖DMEM培養(yǎng)液（含20%胎牛血清，10 0000 U/L青霉素、100 mg/L鏈霉素）混勻細(xì)胞，轉(zhuǎn)入25 mL玻璃培養(yǎng)瓶中，在37 ℃、5% CO2濃度及飽和濕度條件下培養(yǎng)，次日換液，以后根據(jù)細(xì)胞生長情況每48～72 h更換培養(yǎng)液一次，每周傳代1～2次。

1.2.2 流式細(xì)胞儀鈣離子內(nèi)流檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞膜通透性的影響 將Fluo-3AM鈣離子熒光探針溶于1 mL DMSO中，制成1 μg/μL，取對數(shù)生長期細(xì)胞，按1×104個(gè)/皿密度鋪入60 mm×15 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)至單層融合后，給予消化，然后將懸浮液按下述方法給予刺激：①對照組（即將細(xì)胞置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱中同其余各組等時(shí)間培養(yǎng)）；②43 ℃熱打擊組（將細(xì)胞置于43 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h）。打擊后同一時(shí)間每瓶懸浮液按2 μL/100 μL加入Fluo-3AM鈣離子熒光探針，置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱共同避光孵育1 h，予以上機(jī)檢測。

1.2.3 考馬斯亮藍(lán)R-250染色法檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞骨架影響 取對數(shù)生長期細(xì)胞，消化后按5×103個(gè)/片密度鋪入6孔板培養(yǎng)玻片，培養(yǎng)至單層融合后，按下述方法給予刺激：①對照組（即將細(xì)胞置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱中同其余各組等時(shí)間培養(yǎng)）；②43 ℃熱打擊組（將細(xì)胞置于43 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h）。應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)R250染色：①配制M-緩沖液；②傾棄培養(yǎng)上清，加入1 mL PBS沖洗3次；③吸去PBS，用1.5%TritonX-100搖床震蕩處理8 min，3次；④吸去TritonX-100，用M-緩沖液搖床震蕩洗4次，每次3 min；⑤用3%戊二醛固定10 min，給予M-緩沖液洗3次，每次3 min；⑥用0.2%考馬斯亮藍(lán)R250震蕩染色40 min；⑦蒸餾水洗3次，每次孵箱烘干；⑧然后將細(xì)胞玻片置于載玻片上，加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察；⑨如染色效果好，可用二甲苯處理樣品，5 min，兩次，最后一次不要等樣品干；⑩加一滴中性樹膠，加蓋玻片封片，制成永久切片。普通光學(xué)顯微鏡高倍鏡下照片。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞周期改變 取對數(shù)生長期細(xì)胞，按1×104個(gè)/皿密度鋪入60 mm×15 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)至單層融合，按下述方法給予刺激：①對照組（即將細(xì)胞置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱中同其余各組等時(shí)間培養(yǎng)）；②43 ℃熱打擊組（將細(xì)胞置于43 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h）。將43 ℃熱打擊組繼續(xù)置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱孵育，于0、6、18、24 h分別取出后消化，用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。具體操作按武漢碧云天公司細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒說明書進(jìn)行。染色完成后在24 h內(nèi)完成流式檢測。用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488 nm波長處檢測紅色熒光，同時(shí)檢測光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。

2 結(jié)果

2.1 熱打擊對HSKMC細(xì)胞膜通透性的影響

流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果提示，給予培養(yǎng)人HSKMC細(xì)胞不同溫度梯度熱打擊1 h后，如圖1所示，43 ℃熱打擊組鈣離子流式檢測的中位數(shù)為91.63，37 ℃對照組中位數(shù)為22.98。

2.2 熱打擊對HSKMC細(xì)胞骨架影響

本實(shí)驗(yàn)中，同對照組相比，隨著熱打擊程度加強(qiáng)，顯微鏡高倍鏡下可見骨骼肌細(xì)胞骨架逐漸出現(xiàn)變粗、變短、出現(xiàn)明顯的應(yīng)力纖維，見圖2。

2.3 熱打擊對HSKMC細(xì)胞細(xì)胞周期改變

同正常對照組相比，骨骼肌細(xì)胞在熱打擊情況下，DNA含量與細(xì)胞周期中各期百分構(gòu)成比統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別見圖3及表1。3 討論

胞漿Ca2+是細(xì)胞的第2信使。細(xì)胞內(nèi)鈣不僅作為一種重要的第2信使廣泛參與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、分泌、代謝和分化等多種細(xì)胞功能活動(dòng)的調(diào)節(jié)，而且胞內(nèi)鈣離子濃度的變化與調(diào)控對于參與維持存在于細(xì)胞質(zhì)膜或細(xì)胞器膜兩側(cè)的跨膜梯度差，以及介導(dǎo)細(xì)胞對外界刺激的應(yīng)答反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用[13]。研究發(fā)現(xiàn)， 鈣在細(xì)胞損傷過程中起重要作用，各種因素導(dǎo)致的細(xì)胞或細(xì)胞器內(nèi)鈣過度集聚可引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損害，線粒體和細(xì)胞內(nèi)鈣異常增加程度常作為細(xì)胞損傷指征之一[14]。

引起橫紋肌溶解的一個(gè)重要的理論就是線粒體Ca2+超載導(dǎo)致線粒體功能障礙[15]。細(xì)胞內(nèi)外的Ca2+水平變化是微小和迅速的，極難測定，目前定量這些變化在技術(shù)上仍存在一定困難[16]。通過測定熒光強(qiáng)度來反映細(xì)胞中的鈣離子濃度是目前普遍采用的細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測方法。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用流式細(xì)胞儀及Fluo-3/AM檢測不同溫度熱打擊后細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)luo-3/AM負(fù)載的HSKMC細(xì)胞在37 ℃基礎(chǔ)狀態(tài)下就有少量鈣離子內(nèi)流，但隨著熱打擊溫度及時(shí)間延長，43 ℃熱打擊組鈣離子流式檢測的中位值為91.63，而37 ℃對照組中位值僅為22.98，提示細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加，說明在熱打擊的情況下造成細(xì)胞鈣離子內(nèi)流效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載，最終導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞損傷、壞死。

細(xì)胞骨架是細(xì)胞內(nèi)不同蛋白質(zhì)纖維的聚合物和各種調(diào)控蛋白交錯(cuò)連接的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，它參與細(xì)胞分裂及運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)榷喾N功能，在維持真核細(xì)胞的形態(tài)、承受外力、胞內(nèi)運(yùn)輸、變形運(yùn)動(dòng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮著重要的作用，而且還參與許多重要的生命活動(dòng)，包括染色體分離、細(xì)胞中各類小泡和細(xì)胞器的定向轉(zhuǎn)運(yùn)以及白細(xì)胞遷移、游動(dòng)、神經(jīng)細(xì)胞軸突伸展等[17-18]。一般而言，應(yīng)力纖維是支撐細(xì)胞形態(tài)的主要結(jié)構(gòu)，其表達(dá)的改變往往代表細(xì)胞的變形和增殖等變化[19]。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)R250染色法檢測熱打擊對HSKMC細(xì)胞骨架影響，隨著熱打擊時(shí)間及程度加強(qiáng)，同對照組相比，顯微鏡高倍鏡下可見HSKMC細(xì)胞骨架逐漸出現(xiàn)變粗、變短，出現(xiàn)明顯的應(yīng)力纖維。提示熱打擊可改變HSKMC骨架結(jié)構(gòu)，增加HSKMC通透性，同時(shí)使骨架失去正常的網(wǎng)狀有序排列結(jié)構(gòu)，引起細(xì)胞收縮，使HSKMC間隙增大，最終會(huì)導(dǎo)致HSKMC結(jié)構(gòu)和功能出現(xiàn)改變。

多細(xì)胞有機(jī)體的發(fā)生與發(fā)育有賴于細(xì)胞增殖、分化和死亡的精密結(jié)合， 即細(xì)胞周期的正常運(yùn)行。本研究通過流式細(xì)胞儀檢測熱打擊后骨骼肌細(xì)胞細(xì)胞周期分布，發(fā)現(xiàn)骨骼肌細(xì)胞在熱打擊情況下，各組G0/G1期DNA相對含量在44.13～62.98之間，與正常對照組對比，當(dāng)細(xì)胞離開熱打擊環(huán)境后培養(yǎng)18 h前G0/G1期DNA相對含量明顯高于對照組，培養(yǎng)第18小時(shí)才恢復(fù)同對照組基本相同，說明熱打擊情況下，細(xì)胞周期出現(xiàn)阻滯，細(xì)胞被阻滯在G0/G1期，細(xì)胞內(nèi)部活動(dòng)減緩，處于“休眠”狀態(tài)，不能進(jìn)一步發(fā)展到S期和G2/M期，從而不能完成整個(gè)細(xì)胞的分裂過程，大約18 h左右才恢復(fù)至正常狀態(tài)。

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細(xì)胞器范文3

肥大細(xì)胞（mast cell,MC）是多數(shù)脊椎動(dòng)物疏松結(jié)締組織中常見的細(xì)胞，廣泛分布于機(jī)體各個(gè)器官，尤其是皮膚真皮、消化管管壁、呼吸道管壁等全身各處的結(jié)締組織中。來源于骨髓的肥大細(xì)胞，以前體的形式離開骨髓，隨血流遷移至結(jié)締組織，并在那里增殖分化為形態(tài)上特異的成熟肥大細(xì)胞。MC最為主要的生物學(xué)特征之一就是它的異質(zhì)性。上世紀(jì)初, 有些人觀察到大鼠不同部位的MC形態(tài)存在一定的差異性［1］。起源于骨髓干細(xì)胞, 但分化成熟過程及其生理功能卻不盡相同。前體MC離開造血器官, 進(jìn)入胸腺后就可誘導(dǎo)分化成黏膜肥大細(xì)胞, 而進(jìn)入腹腔內(nèi)就分化成結(jié)締組織肥大細(xì)胞。Fujita等［2］報(bào)道, 改變各亞型的相應(yīng)生長環(huán)境, 它們可以發(fā)生表型的互換。因此，分選并鑒定出各發(fā)育時(shí)期肥大細(xì)胞，對肥大細(xì)胞的發(fā)育和功能系統(tǒng)性研究具有重要的意義。本文對肥大細(xì)胞發(fā)育各時(shí)期的分離鑒定方法進(jìn)行綜述。

（一） 小鼠胚胎血始祖肥大細(xì)胞鑒定

胚胎血Thy-llowc-Kitlhigh 細(xì)胞在形態(tài)發(fā)生學(xué)上被證實(shí)為早期的始祖肥大細(xì)胞 ［3］。它含有胞漿顆粒，表達(dá)RNAS編碼的肥大細(xì)胞相關(guān)蛋白酶，缺乏高親和力的免疫球蛋白IgE受體的表達(dá)。Thy-llowc-Kitlhigh細(xì)胞在體外能產(chǎn)生功能活性，當(dāng)轉(zhuǎn)移到腹膜內(nèi)能再生腹膜肥大細(xì)胞。這種肥大細(xì)胞前體在形態(tài)和功能上都有別于造血干細(xì)胞。為了評價(jià)造血潛能，在體外培養(yǎng)了胚胎血Thy-l-c-Kit+ 和胚胎血Thy-llowc-Kitlhigh細(xì)胞［4］。胚胎血Thy-l-c-Kit+ 細(xì)胞在僅有IL-3時(shí)就能產(chǎn)生集落群，在SCF作用下能產(chǎn)生放大效應(yīng)。而胚胎血Thy-llowc-Kithigh細(xì)胞在IL-3或SCF單獨(dú)作用下并不產(chǎn)生集落群，而需二者同時(shí)存在。大量實(shí)驗(yàn)證明胚胎血Thy-l-c-Kit+細(xì)胞比胚胎血Thy-llowc-Kithigh 細(xì)胞更能產(chǎn)生多細(xì)胞系發(fā)育。分離胚胎血Thy-llowc-Kithigh細(xì)胞，通過電鏡觀察［5-9］，剛分離的胚胎血Thy-llowc-Kithigh細(xì)胞具有未成熟肥大細(xì)胞的典型特征，細(xì)胞核，胞漿，高爾基體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等超微結(jié)構(gòu)不同于嗜堿性粒細(xì)胞［6 、8、9］。在 IL-3 和SCF 作用下培養(yǎng), 胚胎血Thy-llowc-Kithigh細(xì)胞成為少核漿比例，較多甲苯胺藍(lán)染色陽性的顆粒的未成熟肥大細(xì)胞。培養(yǎng)了13天后胚胎血Thy-llowc-Kithigh 細(xì)胞就具有更豐富的胞漿和更多的胞質(zhì)顆粒。肥大細(xì)胞的常見特征是表面特異性蛋白酶［10］，故利用半定量RT-PCR，特異蛋白酶(MCCPA,MMCP-2, and MMCP-4) RNA的表達(dá)來分析兩種胚胎血肥大細(xì)胞。胚胎血Thy-llowc-Kithigh 細(xì)胞表達(dá)這三種蛋白酶，而胚胎血Thy-l-c-Kit+細(xì)胞要在上述細(xì)胞因子培養(yǎng)后才被表達(dá)。成熟的肥大細(xì)胞高表達(dá)IgE 受體(FcεRI) ,分析胚胎血Thy-l-c-Kit+和Thy-llowc-Kithigh 細(xì)胞編碼FcεRIα 鏈RNA的表達(dá)， FcεRIα RNA 在體外兩種胚胎血細(xì)胞均不表達(dá)，而在培養(yǎng)后均表達(dá)。在胚胎血Thy-llowc-Kithigh細(xì)胞后代的表達(dá)量是10-100倍，F(xiàn)cεRIα RNA的表達(dá)等同于其結(jié)合細(xì)胞表面IgE的能力。為了評價(jià)體內(nèi)發(fā)育潛能，轉(zhuǎn)移胚胎血Thy-llowc-Kithigh細(xì)胞到c-Kit、肥大細(xì)胞缺陷的W/WV 小鼠［11、12］。 腹膜內(nèi)轉(zhuǎn)移5 x 10-3細(xì)胞, W/WV 小鼠腹膜腔CTMT重建到野生型小鼠水平，且胞漿顆粒染色為典型的CTMC。

（二） 小鼠骨髓未分化肥大細(xì)胞鑒定

以前所使用免疫學(xué)方法鑒定定向始祖肥大細(xì)胞，但并不是使用肥大細(xì)胞特異性的抗體，故也可以識(shí)別其他細(xì)胞，得到的是混合有多項(xiàng)潛能分化的細(xì)胞［13-15］。人類造血干細(xì)胞亞群, CD34+, c-kit+,和 CD13+, 經(jīng)流式技術(shù)從骨髓中分選出來.這種方法獲得的細(xì)胞群經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)最終產(chǎn)生的不僅是肥大細(xì)胞，還有單核細(xì)胞。而通過兩種單克隆抗體mAb-AA4和mAb-BGD6連續(xù)免疫磁性分離成年小鼠骨髓未分化肥大細(xì)胞［16］(AA4-/BGD6+)不包含這些雜細(xì)胞。mAb-AA4］識(shí)別小鼠肥大細(xì)胞表面特有的神經(jīng)苷脂GD1b的兩種衍生物，同時(shí) mAb-BGD6］結(jié)合到與FcεRI 不相關(guān)位點(diǎn)的RBL-2H3肥大細(xì)胞表面。在骨髓肥大細(xì)胞成熟的各個(gè)階段 mAb-AA4和 mAb-BGD6 均結(jié)合到顆粒肥大細(xì)胞。但mAb-BGD6還結(jié)合并不被mAb-AA4識(shí)別的未成熟肥大細(xì)胞。就是這兩種單克隆抗體結(jié)合肥大細(xì)胞形式的差異被用來分離成年小鼠骨髓未分化的肥大細(xì)胞(AA4-/BGD6+)。AA4-/BGD6+細(xì)胞占骨髓細(xì)胞的0.02%、形態(tài)特征是細(xì)胞核大，胞漿少，細(xì)胞器少，無胞質(zhì)顆粒。剛分離的AA4-/BGD6+ 肥大細(xì)胞含有FcεRI α和β 兩個(gè)亞單位的mRNA。但這種受體并沒有在此時(shí)期表達(dá)在肥大細(xì)胞表面，而是在白細(xì)胞介素-3（IL-3）和干細(xì)胞生長因子（SCF)培養(yǎng)下，分化為表達(dá)CD13、c-kit、肥大細(xì)胞特異神經(jīng)節(jié)苷脂和FcεRI，具有異染性顆粒的成熟肥大細(xì)胞，并能結(jié)合免疫球蛋白E(IgE)。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）顯示骨髓未分化細(xì)胞含有肥大細(xì)胞特異性蛋白酶和羧肽酶α和β兩個(gè)亞單位。這些無疑證明了AA4-/BGD6+是肥大細(xì)胞的始祖細(xì)胞。脾臟是c-Kit、肥大細(xì)胞缺陷］的W/W" 小鼠［11、12］成熟肥大細(xì)胞出現(xiàn)的第一個(gè)部位［17、18］，AA4-/BGD6+ 肥大細(xì)胞能在受致死性輻射小鼠脾臟內(nèi)重建，進(jìn)一步證明了這些細(xì)胞代表了肥大細(xì)胞祖。

（三）組織肥大細(xì)胞分離鑒定

肥大細(xì)胞在組織中是其分化成熟的最后階段，表達(dá)一整套特異蛋白酶［10］，發(fā)揮各種功能活動(dòng)。酶消化聯(lián)合密度梯度離心法已被用來分離人類肺臟、皮膚肥大細(xì)胞。肥大細(xì)胞的活性經(jīng)臺(tái)盼蘭染色和血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，純度經(jīng)細(xì)胞離心涂片和甲苯胺藍(lán)染色證實(shí)，此方法獲得的肥大細(xì)胞活性和純度（約10-30%）均下降。溫和酶消化聯(lián)合FcεRI陽性選擇技術(shù)大大改善了此狀況，成功地從乳腺組織和人類前額皮膚以及肺臟中分離出肥大細(xì)胞［19、20］。獲得的肥大細(xì)胞數(shù)量和純度足以用來研究肥大細(xì)胞受體誘導(dǎo)的介質(zhì)釋放，受體依賴的趨向性反應(yīng)及增殖等活動(dòng)。但通過定量PCR和微陣列分析遺傳特征需要更純的（>99%）肥大細(xì)胞，而流式細(xì)胞分選術(shù)(FACS)和免疫磁珠分選很好的解決了這一難題。FACS利用肥大細(xì)胞表面標(biāo)志FcεRI或KIT ，抗體anti-FcεRI-APC (或其同型物對照;小鼠 IgG-APC)或 抗體anti-CD117-PE (或同型物對照;小鼠 IgG1-PE)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)分選程序分選出FcεRI+/CD117+細(xì)胞 ;免疫磁珠分選利用抗體識(shí)別FcεRI.分選富集組織中肥大細(xì)胞［29］。

綜上所述，MC是一種具有高度異質(zhì)性的細(xì)胞群, 其生物學(xué)作用也多種多樣。MC的異質(zhì)性與其免疫功能又有怎樣的聯(lián)系, 以及MC異質(zhì)性的機(jī)制、原因等問題尚不清楚。因此，對于肥大細(xì)胞各時(shí)期分離鑒定，將有助于鑒定肥大細(xì)胞祖的候選基因，進(jìn)一步分析其功能;更加明確肥大細(xì)胞和其他血細(xì)胞（包括嗜堿性粒細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞）的關(guān)系，更加了解肥大細(xì)胞發(fā)育分化，遷徙成熟的軌跡，為研究肥大細(xì)胞在病理生理情況下的功能打下基礎(chǔ)。

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細(xì)胞器范文4

關(guān)鍵詞：再狹窄；中藥；過氧化氫；血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-7717(2008)03-0549-02

The Effect of Traditional Chinese Medicine on the Injured Human Umbiblical

Vein Endothelial Cell Line Induced by Hydrogen Peroxide

CHANG Yan-yan，LU Xiao-dong，WANG Le-ting，ZHAO Li-juan

(Hospital Affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China)

Abstract：Objective：Approach on the protection and possible mechanism of traditional Chinese medicine on the injured human umbiblical vein endothelial cell line (ECV-304) induced by hydrogen peroxide. Methods：Electron microscope and flow cytometry etc. are used to observe the injured pattern of hydrogen peroxide and the effect of traditional Chinese medicine on the ECV-304 cultured in vitro.Results：Hydrogen peroxide group comparing with the control group，apoptosis obviously increase，significant difference (P

Keywords：restenosis；traditional Chinese medicine；hydrogen dioxide；vascular endothelial apoptosis

血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)在PCI術(shù)中的損傷，是造成在組織缺氧缺血，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)功能等病生理變化的主要原因之一。因此，探討缺氧環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞功能的變化，對預(yù)防“再狹窄”具有重要的意義。筆者用不同濃度的過氧化氫(H2O2)作用于體外培的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV-304)中，并利用中藥干預(yù)，觀察VEC的損傷方式及中藥調(diào)控凋亡的可能機(jī)制。

1材料與方法

1.1 材料 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV-304)購于武漢細(xì)胞保藏中心。DMEM和10%胎牛血清(美國Gibco公司)過氧化氫終濃度200mmol/L(本實(shí)驗(yàn)室提供)中藥復(fù)脈濃縮劑(自備)Annexin-V細(xì)胞凋亡試劑盒，(北京寶賽生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品)mini Galaxy-A低氧培養(yǎng)箱，(英國公司出品)；流式細(xì)胞儀FACS Cablibur，生產(chǎn)商BD(美國)。

1.2 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV-304)的培養(yǎng)細(xì)胞用PBS沖洗1～2遍后，離心后棄上清液，加入0.25%胰蛋白酶1.5mL，充分吹打使之混勻消化，約3～5min，終止消化，加入5mL含有10%胎牛血清的培養(yǎng)液，充分吹打混勻，鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)，置孵箱(37℃，5% CO2 )培養(yǎng)。待細(xì)胞達(dá)對數(shù)增長期，實(shí)驗(yàn)共分3組：過氧化氫組(以過氧化氫終濃度200mmol/L加入培養(yǎng)液中)、中藥對照組(加入等量濃度過氧化氫+等量的復(fù)脈濃縮劑)、正常對照組(加入等量的注射用水)分別置于常氧24、48h，低氧24、48h觀察細(xì)胞變化。

2結(jié) 果

2.1透視電鏡下觀察 常氧組 ECV304細(xì)胞膜及核輪廓清晰，細(xì)胞卵圓型，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞漿豐富，胞質(zhì)內(nèi)，MI、HER、GO、Ri等大量電子密度高度分泌顆粒，外有膜包繞，核為圓形，可見核仁；低氧 24～48h組 ECV304細(xì)胞體積顯著減小。部分細(xì)胞腫脹變大，壞死，裂解；過氧化氫組部分細(xì)胞核電子密度增高顯著固縮，染色質(zhì)呈大的團(tuán)塊狀凝集，邊緣化，并沿核膜濃聚成多形性高密度顆粒區(qū)。部分細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器崩解，釋放凋亡小體。線粒體腫脹變大，結(jié)構(gòu)變得模糊不清。胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡變性。見圖1。

2.2 ECV-304細(xì)胞各組凋亡對比 (按Annexin-V細(xì)胞凋亡試劑盒說明進(jìn)行)低氧后過氧化氫組及中藥組與正常對照組在24～48h內(nèi)，細(xì)胞凋亡率分別為30.735±11.38、20.48±7.12、9.24±1.828，各組間差異顯著(P

3討 論

在PCI術(shù)后，內(nèi)皮細(xì)胞的損傷誘導(dǎo)體內(nèi)可產(chǎn)生大量活性氧，由于活性氧導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生凋亡，而凋亡細(xì)胞又表現(xiàn)為胞質(zhì)濃縮，體積變小[1]，因此推測內(nèi)皮細(xì)胞受過氧化氫刺激發(fā)生的這種變化，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度加重[2-3]。筆者實(shí)驗(yàn)室的研究發(fā)現(xiàn)，一定劑量H2O2對體外培養(yǎng)ECV304細(xì)胞發(fā)生損傷效應(yīng)24h以后開始出現(xiàn)，其表現(xiàn)為透視電鏡下“內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)上出現(xiàn)核固縮、細(xì)胞凋亡小體，部分可見細(xì)胞裂解”，流式細(xì)胞儀[4]檢測“細(xì)胞凋亡24h后陽性率增加，中藥濃縮劑組(紅參、黃芪、麥冬、姜黃等)陽性率明顯下降”。由此推斷作用機(jī)制，當(dāng)組織低氧缺血時(shí)，過氧化程度增大，活性氧(H2O2)含量增多，使抗氧化酶(SOD)活性降低?；钚匝醯膽?yīng)激，對死亡受體通路的活化，而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡速度加快，而紅參、黃芪、枸杞、苦參等有效成分，可拮抗由過氧化程度的增大及活性氧(H2O2)含量的增多，并且可上調(diào)抗氧化酶(SOD)的活性 [5]。筆者利用強(qiáng)抗氧化的中藥復(fù)方合劑成功阻止了H2O2 的氧化作用，在降低內(nèi)皮細(xì)胞中活性氧生成的同時(shí)，對內(nèi)皮細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)

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細(xì)胞器范文5

暑假期間，通過同學(xué)介紹，我找到了一份既能賺點(diǎn)小錢又能與自己專業(yè)搭得上邊的工作。工作系“精品購物指南”旗下唯一一本的商業(yè)雜志——《數(shù)字商業(yè)時(shí)代》的……推廣工作。說白了，就是為《數(shù)字商業(yè)時(shí)代》這本雜志做促銷。但說實(shí)在的，我并不認(rèn)為這是一份單純的體力活，我們的工作任務(wù)是每天在不同的報(bào)刊亭售賣這本雜志，在此期間，我看到了一些有關(guān)報(bào)亭的運(yùn)營以及報(bào)刊雜志銷售的現(xiàn)狀。

首先簡單介紹一下《數(shù)字商業(yè)時(shí)代》這本雜志，它是半月刊，每月5號(hào)，20號(hào)發(fā)刊，我們則是在它自然銷售二至三天后開始為期四天的報(bào)亭促銷活動(dòng)。它的單本售價(jià)15元，是一本定位在商業(yè)雜志方向上的雜志，由于受眾較窄再加上知名度不夠，就只能依靠促銷和隨刊附贈(zèng)禮品來吸引顧客。和該雜志比較符合，他們隨刊附贈(zèng)的是《明朝那些事》mp3正版有聲光盤，包裝比較精美，在促銷期間，大部分的顧客都是沖著《明朝那些事》的名氣買的。當(dāng)下的雜志，我們不難發(fā)現(xiàn)很多派送禮品的小品，例如《瑞麗》送包，《昕薇》送香皂、護(hù)膚品等等，這些都屢見不鮮，但大都出現(xiàn)在時(shí)尚雜志中。而商業(yè)雜志例如《第一財(cái)經(jīng)周刊》、《生活三聯(lián)周刊》等，還是很少搞這種噱頭的。當(dāng)然，我們要考慮到的是這本雜志并不像之前所提的那些雜志一樣，擁有強(qiáng)大的知名度以及固定的受眾群，這本雜志已經(jīng)被“精品購物指南”從臺(tái)灣收購到大陸發(fā)行已經(jīng)七八年了，仍舊沒有什么起色，著了急的“精品”開始花大價(jià)錢誓要讓他起死回生。

讓我們來看看，這本雜志由于發(fā)行量不大，知名度不高，廣告自然不多；其次，我想運(yùn)營一份商業(yè)雜志的資金遠(yuǎn)遠(yuǎn)要超過一份時(shí)尚雜志，因?yàn)樗槍Φ氖菍I(yè)人士，不能胡編亂造，甚至有時(shí)候花重金請一些專家在其實(shí)中發(fā)表言論以顯示其雜志的專業(yè)性；要沖銷量自然要促銷，要打名聲自然要做廣告，這樣一來它的運(yùn)營成本就大大提高了。我當(dāng)時(shí)粗略算過，它雜志雇傭的記者編輯，雜志隨刊的贈(zèng)品與印刷費(fèi)用，加上促銷員的工錢以及在報(bào)亭投放需交給郵局的費(fèi)用，就算賣了也賺不了錢，賣的越多，虧得越多。

沒錯(cuò)，“小報(bào)靠發(fā)行，大報(bào)靠廣告”，可這份小報(bào)招不來廣告，而發(fā)行等于虧損，他們的運(yùn)行在于他們身后大財(cái)團(tuán)“精品購物指南”！這是怎樣的一種畸形運(yùn)作?。∫猜犂锩娴墓ぷ魅藛T說過，現(xiàn)在最難得做的就是雜志，沒有強(qiáng)大的經(jīng)濟(jì)支柱，根本做不起來，看來他們的雜志已經(jīng)把這條規(guī)律體現(xiàn)的淋漓盡致了。

二、我看：北京各報(bào)亭銷售

在報(bào)亭實(shí)地促銷的過程當(dāng)中，也不難發(fā)現(xiàn)銷量最大的是法制晚報(bào)、新京報(bào)、北京晚報(bào)、精品購物指南等價(jià)位在一元且信息量大報(bào)紙。就《精品購物指南》來看，在朝陽區(qū)較繁華地區(qū)，一般每天有五十份以上，有促銷員促銷時(shí)一個(gè)早晨就能達(dá)到一百二十份，甚至更多。不同的地區(qū)銷售的報(bào)刊雜志天差地別，例如在國貿(mào)一帶，除了便宜的報(bào)刊，雜志走的也相對較快，像我當(dāng)時(shí)所促銷的《數(shù)字商業(yè)時(shí)代》也是最好賣的，那一帶的人群相對容易接受更有深度的東西，而不是是些街邊新聞，或者法制消息。與之相反的，在勁松橋一帶的報(bào)亭，即陳舊的小區(qū)邊上，走的好的一般都是一元一份的新京報(bào)、法晚、北晚、參考消息等，連精品都很少賣。還有一種，則是在工體一帶，會(huì)有一些時(shí)尚人士，走得相對較好的就是瑞麗、昕薇、coco等時(shí)尚雜志，這些人一般不太看重價(jià)錢，看上眼了就直接拿走，而他們也是除了商業(yè)人士以外促銷的“攻擊”對象，因?yàn)樗麄冑徺I雜志時(shí)相對較為盲目，只要你口才過得去，抓住他們的需求點(diǎn)，成功率會(huì)很高。

在這個(gè)暑期實(shí)習(xí)當(dāng)中，雖然沒有進(jìn)大報(bào)社，但在與報(bào)刊亭主的閑聊之中可以發(fā)現(xiàn)在報(bào)亭和雜志社之間，有一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，那就是——郵局。報(bào)刊亭主大多是外地人，常常也聽他們對我吐苦水，他們語言質(zhì)樸，大多是些“郵局黑心”之類的抱怨。每份雜志如果要上報(bào)亭每年必須交給郵局5萬塊錢，而其他的雜志如果和亭主協(xié)商好，能夠放上報(bào)亭，則有可能等來被抄報(bào)的命運(yùn)。還有許多報(bào)刊是有“任務(wù)”的，例如，雙井橋一帶的一個(gè)報(bào)亭，法晚、北晚、新京報(bào)等都有各20份的“任務(wù)”，如果賣不掉那就只能報(bào)刊亭自己吃了，如果有虧損，也只能啞巴吃黃連的份兒，而郵局每天都穩(wěn)穩(wěn)拿著這些銷量。

三．我看：《北晚》、《法晚》、《新京報(bào)》

法晚、北晚、新京報(bào)，是我在報(bào)亭的時(shí)候賣的最火的三份報(bào)刊，無論在哪一個(gè)報(bào)亭，“來份兒法晚！”，“來份兒北晚！”，“來份兒新京報(bào)！”的聲音不絕于耳。于是，我購買了幾天這三份報(bào)刊準(zhǔn)備一看究竟。

（以下的三份報(bào)紙均拿8月25日的為例）《北晚》的版塊布置，首先是各類新聞：今日要聞、科教新聞、北京新聞、財(cái)經(jīng)新聞、警法新聞、熱線新聞，接下來是娛樂版塊，此版塊所占篇幅較大，接下來是小規(guī)模的文學(xué)散文，智力休閑，最后是世界新聞、體育新聞。

《法晚》的編輯排版大致與《北晚》相同，但多出了名為“車尚”這一個(gè)板塊，里面是一些車子的信息，占用了10個(gè)版面，而《法晚》當(dāng)期共60個(gè)版面。其中與《北晚》還有些不同的，他里面有連載的小說，雖然只占用了一個(gè)版面，卻也體現(xiàn)出該報(bào)紙的特色，這可是一個(gè)長期工??！

《新京報(bào)》并沒有什么特別突出的版塊設(shè)置，但總體編輯排版上相對那兩份報(bào)紙要舒服，彩板頁面較多，圖片較為豐富，這個(gè)不可否認(rèn)的比其他兩份報(bào)紙要出色的地方。

而就內(nèi)容上來說，這三份報(bào)紙的內(nèi)容是存在很大差異的，同一天的報(bào)紙，卻很少看到相同的消息，但報(bào)頭在當(dāng)天卻比較一致，都是有關(guān)國慶慶典安排的新聞。這樣一來媒介則發(fā)揮了它最原始的功能，國家統(tǒng)治工具喉舌，傳播著至上而下的重大事件。

在數(shù)字新聞飛速發(fā)展的今天，街邊的報(bào)刊亭仍舊屹立不倒，證明了紙媒介在當(dāng)今社會(huì)的地位。而如何發(fā)展好一份紙媒介，說到底要看最底層的銷售，從那里摸索銷售模式，再上升到如何設(shè)置報(bào)刊內(nèi)容，最后到經(jīng)營管理。

并不是每一個(gè)經(jīng)營者都看到過報(bào)亭銷售，紙上談兵有可能葬送一個(gè)雜志社的前途；并不是每一個(gè)編輯都了解過受眾的需求，閉門造車有可能造成孤芳自賞的結(jié)局！于是，我很慶幸，這一個(gè)暑假我沒有白過，在推銷的期間，我看到各種人群的需求，各色報(bào)刊雜志的銷售情況，利用閑下來的事件翻看過部分報(bào)刊內(nèi)容，看到它們之中的閃光點(diǎn)。

細(xì)胞器范文6

此外，手部運(yùn)用亦有所精進(jìn)。玩玩具時(shí)，除了用拍、丟、敲打等方式挑戰(zhàn)不同玩法外，也試著以大拇指和其它手指合作抓握物品，或是單獨(dú)伸出食指觸摸，偶爾還能用拇指、食指配合捏拿，這些突破，都是未來靈活操作工具的關(guān)鍵指標(biāo)。

當(dāng)眼前的人或物突然不見了，小寶貝會(huì)努力嘗試翻弄尋找。有時(shí)玩具或奶嘴掉了，孩子能目視掉落的物品，并發(fā)出聲音示意；當(dāng)旁人揀起后，寶貝又刻意弄掉，希望東西再度被拾回。

由于聽音辨聲和視覺觀察的能力愈來愈強(qiáng)，孩子對于旁人的嘴形特別留意，當(dāng)有人說話時(shí)，小寶寶不但專心注視其嘴部的變化，還會(huì)努力模仿發(fā)音，或以肢體語言積極響應(yīng)。像是想要抱抱，便張開雙臂往前；對于“再見”、“謝謝”等指令，會(huì)搭配特定的動(dòng)作展現(xiàn)。

為了幫助7～9個(gè)月的寶貝更快樂地成長，我們特別設(shè)計(jì)了多種親子游戲，只需要一點(diǎn)點(diǎn)時(shí)間和簡單的道具，就能讓你和寶寶玩得很開心！

7個(gè)月

名稱：自由落體

材料：親子熟悉的歌謠數(shù)首

步驟：1.親子面對面。

2.大人坐在地板或床上，伸直雙腿，讓寶寶坐在自己的膝蓋上。

3.大人一邊唱歌，一邊縮回小腿、抬起膝頭。

4.當(dāng)膝蓋抬到最高點(diǎn)時(shí)，大人停止唱歌，看著寶寶，說：“一，二，三！”

5.大人數(shù)到三時(shí)，同時(shí)把腿放平，并發(fā)出“哇！”的音效。

6.假如小孩的反應(yīng)良好，可以重復(fù)幾次。

好處：聽覺刺激、平衡練習(xí)、期待情緒。

8個(gè)月

名稱：秋千保齡球

材料：干凈的中型寶特瓶三個(gè)

步驟：1.大人先將寶特瓶三個(gè)依序擺好，間距不要太大，然后扶著寶寶面對瓶子站好。

2.接著由大人扶握孩子腋下，并抱起離地懸空，前后輕輕搖晃，好像蕩秋千一樣。

3.當(dāng)寶貝習(xí)慣了搖晃的感覺，大人可稍微用力，并在往前時(shí)，協(xié)助小寶寶踢倒球瓶。

4.球瓶倒了，大人要抱著孩子高聲歡呼，并觀察其表情。

5.如果小寶貝喜歡玩，不妨重復(fù)進(jìn)行，并試著增加瓶數(shù)或調(diào)整瓶子之間的距離。

好處：下半身力量、平衡練習(xí)、觸覺刺激。

9個(gè)月

名稱：健康步道

材料：薄被一條、襪子數(shù)雙

步驟：1.大人先把一雙一雙的襪子對折反套，形成數(shù)個(gè)扁扁的襪子球。

2.接著在孩子注視下，把襪子球鋪在地面，并蓋上薄被，變成安全的健康步道。

3.大人扶著寶寶腋下，先在平坦的地方練習(xí)邁步移動(dòng)。等孩子適應(yīng)了，再走健康步道。

4.有時(shí)寶貝走著走著，會(huì)突然趴下，并嘗試翻動(dòng)背面，尋找藏在底下的襪子球，大人可以一起幫忙。