前言：中文期刊網精心挑選了仰望大樹范文供你參考和學習，希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感，歡迎閱讀。

仰望大樹范文1

北京的秋十分短暫，從十月底開始，僅僅一個月時間，這個大都市如同走T臺般剎變風格，收起夏日的雷厲風行，瞬間變得雍容華貴。讓人敬畏且耐人尋味。瑟瑟秋風把人潮人海收縮在角落里靜候冬天的訊息，而盛裝的金黃卻悄然擺陣，退去繁華，古樸的人文氣息盡顯無遺。一簇簇的黃與紅揉碎陽光，為自己鍍上絢爛的顏色。陽光、藍天、紅葉，用北京的話說，那叫“齊活”，所以秋天成了北京最美的季節。特別是那金色的銀杏，秋風掃過，落葉旋轉而落，景色美得可以讓每位路人駐足。

北京市內賞秋的地方很多，各個公園有水有樹的地方秋色都不錯，但金黃的古銀杏樹與北京老建筑搭配在一起才算最出味道。本刊特意選擇北京市內九個具有代表性的秋景地推薦給大家。

TOP1.

釣魚臺國賓大道

雖說北京最有名的是紅葉，但最美的卻是銀杏葉。北京地區的銀杏種植歷史比較久遠，很多地方都有銀杏樹，但最美最有名的銀杏大道還是要數釣魚臺國賓館門前這塊兒，據說這里的銀杏是北京最早種下的一批，現在釣魚臺可以說是北京觀賞銀杏的一個地標。

交通：此處沒有停車位，最好乘坐公共交通前往，坐1號線地鐵到木樨地下車，或114路、102路、103路、特6、320路等公交車在釣魚臺站下車。

溫馨提示：這兩年由于去釣魚臺看銀杏的人太多，地面“銀杏地毯”的效果已經開始大打折扣，但樹上的銀杏效果還是不錯。著名的玉淵潭公園就在旁邊，看完銀杏可順道去轉轉。

TOP2.

地壇公園

地壇公園的銀杏大道遠近聞名，從公園北門進入，兩排高大的銀杏樹便讓你一覽無余。秋意未濃時，這里已有很多游客觀賞銀杏，攝影愛好者也拿著長槍短炮一取美景。在這里可漫步在銀杏大道，也可帶著孩子在游樂園玩耍，老人可聽公園里的票友唱戲，或是跟著舞蹈隊跳上一段。

地址：北京市東城區安定門外大街。

交通：104路、108路、124路電車地壇站，地鐵安定門站下車，自駕車可停在西門旁地壇體育場內。

溫馨提示：賞銀杏從北門進便可直接到達銀杏大道。

地壇公園簡介：地壇又稱方澤壇，是古都北京五壇中的第二大壇。始建于明代嘉靖九年（公元1530年）是明清兩朝帝王祭祀“皇地o神”的場所，也是我國現存的最大的祭地之壇。

TOP3.

三里屯東五街

三里屯東五街是北京的使館區，道路兩旁齊刷刷地種著兩排銀杏樹，從街西口到街東口。相比公園景點的人來人往，這里顯得嚴肅了很多，站崗的門衛會目視著你的一舉一動。銀杏樹的美景在這里顯得更加美麗。這里真是北京一片少有的凈土，除了偶有的出租車外，一個行人也沒有。漫步在三里屯東五街，特別像是在某個電影中的Ending畫面之中。

交通：302路、300路亮馬橋站，113路、758路、416路三里屯站下車。

溫馨提示：如果不想惹不必要的麻煩，最好不要拿著相機拍太多。因為不通公交，因此下車后都需要步行10分鐘到達；三里屯附近坐幾站車可以到朝陽公園，走幾步可以到著名的三里屯酒吧街和商業區。

TOP4.

景山公園

只要來北京的都會到景山上走一遭，因為那里能俯視全城，看金碧輝煌的古老紫禁城和現代化的北京城。如果秋日走上景山頂，看的不是銀杏，但那滿眼的秋黃與紅色的故宮墻壁交相呼應，歷史的滄桑與厚重讓人更加尋味。景山公園內也有銀杏，也許是因為某個皇帝在這里自縊，所以人們不是很喜歡在這里欣賞景色，但這般靜謐正好迎合了攝影者的口味。

交通：5路景山西街下，58、60、111、124路景山東街下車，101、103、109、124、810、685、814、846路故宮下車。

地址：北京市西城區景山西街44號。

溫馨提示：秋季景山上有很多柿子掛在樹上，一片片的很好看。

TOP5.

頤和園小湖邊

秋天的頤和園是北京秋天美景的一處，園中山水和多層次變幻的植物，展現出了秋天北京的美麗景致。銀杏樹在頤和園的西南角，石舫附近。銀杏樹共有三顆，分布在小道的兩旁。兩顆大些的在靠近水邊，稍小一些的靠近一個院門。扇形的樹葉落在銀杏樹附近的綠地上，綠草地上散落著的一堆堆、一片片小金葉很是好看！

地址：北京市海淀區頤和園路。

交通：乘地鐵四號線，北宮門下車即到（北宮門）。也可在西苑下車，經由同慶街西行500米到達頤和園東宮門（正門）。

門票：淡季20元（11月1日―3月31日），旺季30元（4月1日―10月31日）。

TOP6.

中山公園

在中山公園入口，便會看到好幾株巨大的銀杏樹，好像一頂頂黃龍傘分外耀眼。清風吹拂，落葉飄灑，紛紛揚揚，綠茵如毯的草地鋪滿金色的葉片。中山公園還經常會有一些花展，可以順道留意。

地址：位于北京市中心紫禁城南面，天安門西側。

交通：地鐵天安門西站下車，出B口向東步行5分鐘，進中山公園南門；如果自駕車的話，晚18點之前，車輛可停放在中山公園西門公共車場（約30個車位）；晚18點之后，車輛可停放在中山公園內停車場（約30個車位），或停放在公園東門外（約20個車位）。

TOP7.

清華北大

走進清華南門，正對著是一條通暢的南北大道，沿大道直行，及至南北大道與東西大道交匯的路口，是一個寬闊的十字路口，從十字路口西行，是一條銀杏成行的大路，此路有小小的弧度，到了秋天，這條路就是一條燃燒的金黃色夢幻大道。清華另一個銀杏地就是清華大學宿舍五號樓了，這里是過去清華的本科女生居住樓之一，配上樓下的銀杏，別有一番氣質。秋天，樹上的銀杏葉片全部變成金黃，一陣風之后就落在地上，整個小院子都鋪滿了黃燦燦的銀杏葉。

北大西門的兩株巨大古樹，已經成了北大秋景的標志。西門前共有4棵銀杏樹，不過后面的兩棵總不被注意。前面兩棵大樹實在太老了，老得沒人能說清到底是哪年哪月誰種的了，不過據說都有300多年歷史，可從來不結果，因為是雄的。看銀杏的時候順便看看樹邊的華表，其實不是一對兒，當年運錯了，可也就將錯就錯了。

交通：直接到達清華大學南門的車很少，可以先到西門，然后去南門看銀杏。直達西門的公交很多，有特4、特6、運通105、運通205、310、320、331、365路等，或者地鐵13號線到五道口下車，向西步行十分鐘左右即可到達清華東門。去北大看銀杏可乘坐718路、332路，在北京大學西門站下車。

地址：北京市海淀區學院路。

TOP8.

國家圖書館

很多人并不了解，位于海淀區的國家圖書館是歷史上的元代大護國寺，因此在這里也藏身兩株有700多年歷史的古銀杏樹，矗立在舊的國圖主樓西側，它們被一片草地包圍著，像一對從容的老者，春華秋實，淡定面對歷史變遷。

交通：可乘坐地鐵4號線或105路、106路、323路、717路等公交車國家圖書館站下車。

地址：北京市海淀區中關村南大街33號國家圖書館。

溫馨提示：國圖開放時間為周一至周五9：00-21：00，周六至周日 9：00-17：00，法定節假日不閉館。

TOP9.

郭沫若故居

什剎海柳蔭街的恭王府鼎鼎大名，“一座恭王府，半部清代史”，這句話更成了恭王府門口排隊扎堆兒的三輪車師傅的口頭禪。殊不知在它對面的郭沫若故居則是一處賞銀杏最佳的幽靜之地，僅一墻之隔，馬路上的熙來攘往、熱鬧喧嘩，全都聽不見了。坐在院內長椅上，只有陽光和鳥聲，坐在樹下看書，陽光灑下來，寧靜而溫暖。宅院內有銀杉樹、松柏、海棠、銀杏等等，都是郭老夫婦當年親手種下的。

交通：乘13路、107路、111路、118路到北海后街下車，路北向西。 溫馨提示：郭沫若紀念館9：00-16：30，周一閉館，門票20元，學生半價。另外，附近的輔仁大學也是個鬧中取幽的去處

TIPS

既然是來感受地道的故都秋味兒，那肯定要住在四合院才夠味兒。這些地方你可以考慮：

北京清風雅筑四合院客棧

地址：北京市西城區趙登禹路大茶葉胡同20號

價格：六人房60元/床；三人房80元/床；大坑普房160元/間

聯系：010-66160200

推薦理由：坐落于北京白塔寺保護區里傳統的老北京胡同之中，是一座具有北京特色的四合院客棧。房間不大，但精致，古典的家具，中國傳統的窗花、剪紙、石雕，還有原創水墨畫，北京的傳統與古典，盡在其中。

北京易靜小棧

地址：北京市東城區花梗胡同23號院

價格：多人間 70元/間；標準間 298元/間

聯系：010-64004560

推薦理由：院里有一株百年海棠，還有一顆巨大的香椿樹，四周綠樹環繞，在這里可以感受繁華都市中那一院清幽。

北京王家四合院客棧

地址：北京東城區東四六條月牙胡同10號院

價格：大床房298元/間

聯系：010-64021671

推薦理由：坐落于北京東四歷史胡同保護區核心，緊鄰地鐵五號線路站。客棧全部按中國古典建筑風格裝修，不論從擇地，定位，尺度，選材及用料都極盡講究，既體現了古老的中國建筑的傳統和風俗，又嚴格地遵循著指導中國千百年來的風水理論。

北京合家立四合院旅館

地址：北京東城區鼓樓東大街西公街1號。

仰望大樹范文2

尋找“海洋巨無霸”

杰克和吉娜是葡萄牙著名的海洋生物學家，他們不僅是工作上的合作伙伴，還是一對相親相愛的夫妻，他們一年中至少有一半時間都在海洋考察船上度過。

2006年初，杰克和吉娜接到葡萄牙一家海洋生物博物館的邀請，希望他們能協助捕捉一條身長至少超過12米長的大王烏賊做成標本放在博物館里供人參觀。3月上旬，一行9人的捕撈隊從里斯本的港口乘坐著一艘科學考察船出海了。

對于大王烏賊，杰克和吉娜并不陌生，迄今人類所發現的最大的大王烏賊有22米長，重達3噸，杰克和吉娜決心打破這一世界紀錄，捕獲到更大的大王烏賊，他們這樣做的打算不僅僅是為了可觀的獎金，更是希望借此來喚起人們對這種海洋奇異動物的重視和保護。

杰克和吉娜考察的這片海域位于大西洋上的公海，平均深度有2000多米，是大王烏賊理想的棲息地。

3月15日，天氣晴朗，能見度高，海面上風力微弱。科考船的船長納桑卡已經下定決心，如果今天還是一無所獲的話，他將下令放棄這次捕撈大王烏賊的計劃，啟程返航。

這天中午，船員們剛剛用過午飯，突然船身猛地一震。難道是觸礁了？大家紛紛跑到甲板上去看，但船并沒有任何觸礁的跡象。那么，是什么樣的力量使科考船發生如此劇烈的震動呢？杰克心中又驚又喜，難道是撒下的拖網捕獲到了大王烏賊？根據科考船搖晃的程度，如果確實是網住了大王烏賊的話，那么這只海洋巨獸身長至少在15米以上。

一個船員跑到船舷邊去查看，當他剛把腦袋探出去，一條粗大的觸手就突然從海面伸出來，把他卷進了水中，他只來得及發出一聲慘叫就消失了。大王烏賊可怕的觸手不斷地席卷靠近船舷的一切物體，把它們帶下海里，激起片片浪花。

為了保持標本的完整性，船員們不敢用刀砍，不能用槍擊，只能用棍棒打擊那些觸手，使它負痛縮回去。有幾個船員不小心被大王烏賊的觸手纏繞，等其他船員好不容易把他們解救出來時，那些遭大王烏賊用吸盤襲擊過的船員身上已經被吸附掉了一塊塊巴掌大的肉，露出血淋淋的傷口，被觸手纏繞過的地方也是傷痕累累，慘不忍睹。而杰克和吉娜一邊和大王烏賊搏斗，一邊用攝像機拍下這一幕幕真實而珍貴的鏡頭，以便日后向世人展示這種兇猛無比的海洋巨獸的神奇之處。

海下生死搏斗

等攀附在船舷上的大王烏賊的觸手都縮回去了后，船長納桑卡趕緊命令船員啟動機器，將拖網拉上來。當拖網被拉上水面，人們才發現里面有一只身長足有20米的大王烏賊，它依然在奮力掙扎，夾了鋼絲的拖網已經被它咬出了好幾個窟窿，那些觸手正是從窟窿里面伸出來的。

就在這時，科考船又是猛地一震，不過這次是船真的出事了，由于慌亂中操作失誤，船不慎擱淺在一片珊瑚礁上。更倒霉的是，絞動拖網的機器裝置也發生了故障，而想靠人工把至少有2噸重的奮力掙扎的大王烏賊拉上船是根本不現實的，大家只好眼睜睜地看著拖網又緩緩淹沒在海水中。

所有人都明白，如果不能及時把捕獲到的大王烏賊拉到船上，那他們這些天來的全部努力和血汗都將白費。從科考船的顛簸程度來看，那只大王烏賊仍在拖網里掙扎，它已經咬開了幾個窟窿，要是它這么持續不斷地掙扎下去，它遲早會逃之夭夭。必須果斷地采取補救措施，現在要想捕獲活的大王烏賊已經不太現實，只能退而求其次，用麻醉槍擊昏那只大王烏賊，這樣等絞動拖網的機器裝置修好后，他們還可以將它拖上船。可是派誰去水下制服大王烏賊呢？

杰克和吉娜自告奮勇地站了出來，他們是出色的潛水員，又熟悉大王烏賊的習性，萬一出現了什么意外情況也比較好處理。船長納桑卡緊緊地握了握這對夫婦的手，科考船上剩下的所有船員也都一一上前和他們倆握手，眼里充滿了敬佩的目光，因為大家都知道，海底洋流變幻莫測，情況十分復雜，垂死掙扎的大王烏賊又隨時可能給人致命一擊，所以去水下制服它是件極其危險的事情，稍有不慎，就可能命喪海底。

杰克和吉娜穿上潛水服，帶上潛水裝置就下到了海里。在下潛前，夫婦倆緊緊地擁抱了一下，他們作了最壞的打算，因為這也許是他們最后一次親密擁抱。其實在每次海上危險作業前，夫婦倆都要進行一次這樣的擁抱和接吻，這似乎成了他們結婚近10年來表示恩愛的一種習慣。

海面上陽光燦爛，海水里的能見度卻不好，10米左右就是漆黑一團了，杰克和吉娜只能借助頭盔上的潛望燈辨別周邊的物體，不時有各種各樣美麗的魚從光暈中游過，色彩斑斕的珊瑚像樹林一樣矗立在四周，如果不是因為要完成一件危險的任務，他們是很樂意欣賞這海底世界的美景的。科考船上的拖網深度大概在水下60米左右。不久，他們就循著翻騰的海水找到了那只被拖網束縛住了的大王烏賊，這時，他們才看清是一只母大王烏賊。此刻，它似乎已經精疲力竭，掙扎不那么劇烈，蜷縮成一團躺在拖網里，偶爾才舒展一下觸手，驚得四周的魚兒飛速逃竄。

一切進行得似乎比較順利，杰克和吉娜一左一右舉起麻醉射槍瞄準。就在這時，吉娜感覺身軀被什么東西重重地抽打了一下，她一下子失去重心，麻醉射槍掉到了深不可測的海底。她回頭一看，頓時嚇得魂飛魄散，一條比拖網網住的那只還要大得多的公大王烏賊就在她后面，正瞪著兇惡的大眼睛，向她伸出了猙獰的觸手。杰克也發現了吉娜面臨的危險，他趕緊游過來，迅速向那只大王烏賊開槍射擊，但遺憾的是，慌亂中打歪了。杰克調整好姿勢，又朝那只大王烏賊舉起了槍，但一股突然涌出的海底暗流將他沖到了一邊，麻醉彈再次射偏。

這時，吉娜已經被大王烏賊的一只觸手纏繞住了腰部，觸手的力量非常大，吉娜怎么也掙不脫。杰克看見大王烏賊和吉娜糾纏在一起，不敢隨便開槍，只好游過去，拔出用來防鯊的潛水匕首向纏住吉娜的觸手刺去，大王烏賊負痛松開了被刺傷的一只觸手，但另一只觸手又揮舞了過來，吉娜貓腰躲過，拔出自己身上攜帶的潛水匕首，用力反手一割，大王烏賊的這只觸手也被割傷，大片藍色的血液流了出來(注：大王烏賊的血液中沒有血紅素，含血藍蛋白，所以血液呈藍色)。但大王烏賊的頭上一共有10只觸手，部分觸手受傷后，它還可以繼續用剩下的觸手攻擊。

杰克的麻醉射槍在慌亂中被大王烏賊的觸手打落。為了避免再被大王烏賊的觸手纏繞住，杰克和吉娜不斷地揮舞著潛水匕首，因為海水的壓力比較大，他們又穿著笨重的潛水服，所以他們很快就筋疲力盡。這個時候，被拖網網住的那只母大王烏賊看見同伴來救它了，也興奮起來，從拖網的窟窿里不斷掙扎著伸出觸手，隨時準備給在它周圍驚慌打轉的杰克和吉娜以致命的打擊。

深海情歌一曲

杰克和吉娜四處躲閃，拼命抵抗，現在他們只得放棄原定計劃，尋機逃命，可是為了避免致命的減壓病，他們又不能快速上浮，而大王烏賊卻張牙舞爪緊緊追著他們不放，似乎不將他倆撕碎絕不罷休。慌亂中，吉娜向附近的一個珊瑚洞穴游去，這個珊瑚洞穴外面的洞口比較大，剛容一人通過，但里面就越來越窄，根本不能進去。吉娜是倒退著進洞的，剛一進去，她背負的潛水瓶就卡在了洞里狹窄的巖壁上，整個身體頓時動彈不得。

從吉娜被卡的位置到洞口只有不到五米，大王烏賊十來米長的觸手完全可以伸進來把她絞死。杰克伸手去拉吉娜，但沒有拉動，而且他不敢過分用力，擔心把氧氣筒扯脫。杰克徘徊在洞口，心急如焚。吉娜知道，她已經無法逃脫，如果杰克再不逃走，兩個人很可能會同歸于盡。吉娜向杰克打著手勢，示意他不要管她，趕緊逃命，但杰克卻好像沒看見，繼續小心翼翼地拉著她，守護著她，還用手勢示意，寧愿一起死，也絕不獨自逃命。吉娜的眼眶濕潤了。

眼看著大王烏賊一步步逼近，杰克和吉娜絕望了，但就在此時，他們看見那只大王烏賊突然轉身，再定睛一看，原來是一條巨大的抹香鯨游了過來。抹香鯨喜食大王烏賊，但兩者遭遇，常常有一場生死之戰。抹香鯨碩大的魚頭像是一顆超級導彈，它朝拖網里的那只母大王烏賊撲去，血盆大口已經張開，杰克和吉娜都知道，抹香鯨牙齒的力量大得足以將拖網連同網中的母大王烏賊一起撕成碎片。但那只公大王烏賊卻奮不顧身地阻斷了抹香鯨的進攻，它的觸手和吸盤死死地纏住了抹香鯨的頭，抹香鯨則奮力掙扎，試圖咬住大王烏賊的觸手。濁浪翻滾，場面壯觀，大王烏賊的觸手已經被咬斷了好幾根，而抹香鯨的身上也是遍體鱗傷，鮮血從它的傷口噴涌而出，染紅了周邊的海水。

20多分鐘后，抹香鯨終于占了上風，它巨大的尾鰭將那只公大王烏賊打得暈頭轉向，然而，困在拖網里的母大王烏賊卻不允許抹香鯨將自己的伴侶傷害，它掙扎著用觸手去襲擊敵人，抹香鯨被激怒了，又掉頭撲向它，但那只公大王烏賊稍稍回過神來后，忍著傷痛，繼續向抹香鯨發起了攻擊。就這樣，抹香鯨在兩只大王烏賊的輪番抵抗中浴血奮戰，一下也討不到太多便宜。杰克一邊觀看著大王烏賊和抹香鯨的血戰，一邊盡力幫吉娜脫險。他們都知道，大王烏賊體內直腸末端長有一個貯備墨汁的墨囊，當它逃生的時候，能持續五六次噴出墨汁，把上百米范圍內的海水染黑，使對手受驚迷惑。這種墨汁里含有麻醉劑，可以麻醉對手的嗅覺。如果那只公大王烏賊采用此絕招的話，它完全可以獨自逃生，但為了營救自己的伴侶，它甘愿留守在這里堅持以命相搏。

仰望大樹范文3

【摘要】 目的 研究bcl2、bax凋亡相關基因在低氧處理大鼠肺動脈中的表達，探討低氧肺動脈高壓的發病機制及防治措施。方法 36只Wistar大鼠隨機分為3組，分別為正常對照組、低氧肺動脈高壓組、低濃度一氧化碳(CO)組，每組12只，采用原位細胞凋亡、原位雜交、免疫組化等方法檢測肺動脈的凋亡狀況。結果 ①原位凋亡檢測示，正常對照組、低氧肺動脈高壓組、低濃度CO組的凋亡率分別為8.1%，37.6%，76.5%，三者間差異顯著；②原位雜交顯示，正常對照組bax、bcl2雜交呈弱陽性表達。低氧肺動脈高壓組bax雜交呈弱陽性表達，低濃度CO組呈強陽性表達，但bcl2雜交可見低氧肺動脈高壓組呈強陽性表達，低濃度CO組呈弱陽性表達；③免疫組織化結果表明，低濃度CO組bcl2、bax蛋白均有升高，以bax為著。低氧肺動脈高壓組雖然也有表達，但程度較弱，且bcl2表達處于優勢。結論 低濃度CO可以調節bcl2、bax凋亡基因的表達，從而促進肺動脈組織的凋亡。

【關鍵詞】 低氧；肺動脈高壓；凋亡

肺動脈高壓(PH)病因復雜，可由多種心、肺或肺血管疾病引起。肺血管重建被認為是低氧肺動脈高壓的主要病理變化〔1〕，肺動脈平滑肌細胞(PASMC)的增殖可能是導致PH形成的重要環節，增加平滑肌細胞凋亡可以逆轉PH肺血管重建〔2〕。在bcl2基因家族中，bcl2是凋亡抑制基因，bax是凋亡誘導基因，二者比率是影響細胞凋亡的關鍵。以往體外研究〔2〕發現，低氧可以促進肺動脈平滑肌細胞的增殖，而低濃度CO可以部分抑制低氧對肺動脈平滑肌細胞的作用。為深入探討其機制，本研究利用全自動缺氧艙復制低氧性PH大鼠模型，分別給予常氧、低氧、低氧與低濃度CO處理，觀察肺動脈bcl2、bax基因的變化，探討PH發病機制，為其防治提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 低氧PH大鼠模型制備及處理分組

選擇健康成年雄性Wistar大鼠36只，體重(200±25)g (購自第三軍醫大學實驗動物中心)，隨機分為3組，每組12只。正常對照組：放在室溫下依常規方法飼養；低氧PH組：依我所方法建常壓低氧倉，保持O2濃度為(10±0.5)%，每天7 h，每周6 d，周日休息，持續3 w；低濃度CO組：每日低氧2 h后通入1次調制好的2 μmol/L的CO 15 min。

1.2 原位細胞凋亡檢測

參照試劑盒說明書方法略加修改。先用PBS (pH 7.4) 漂洗組織切片，然后4% PFA固定組織切片30 min；室溫下0.3% H2O2封閉15 min，PBS漂洗2×3 min；0.1% TritonX100 4℃通透10 min，PBS漂洗2×3 min；加入由末端脫氧核苷酸轉移酶 (TdT)，脫氧三磷酸核苷 (dNTP) 和熒光素標記的脫氧三磷酸尿苷(dUTP)組成的混合液30 μl，37℃反應1 h，熒光顯微鏡下觀察并照相；加入過氧化物酶(POD)連接的抗熒光素抗體20 μl，37℃反應30 min，PBS漂洗3×5 min；滴加新配制的0.01%H2O2/0.05%DAB顯色液，顯微鏡下觀察，顯色約10 min左右，清水沖洗終止反應；蘇木素輕度復染，常規系列酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。光鏡高倍鏡下，觀察5～8個視野，計數200個細胞以上，計算陽性細胞百分率。

1.3 原位雜交檢測

參照文獻〔3〕方法，所需試劑和器械均經DEPC水處理。取實驗組及對照組動物肺動脈組織，基本過程如下：切片在0.1 mol/L PBS (pH 7.2，下同)中漂洗5 min×3，再2×SSC漂洗10 min；蛋白酶K (20 μg/ml，Merck產品) 消化，37℃孵育5 min；0.1 mol/L甘氨酸/0.1 mol/L PBS漂洗5 min；4%多聚甲醛漂洗5 min；0.1 mol/L PBS漂洗5 min×3，再2×SSC漂洗10 min；預雜交后置42℃水浴中2 h；在每張片子上加20 μl地高辛標記探針雜交液，用DEPC水處理的膜覆蓋，于濕盒中42℃孵育20 h；取出切片，去膜，4×SSC及PBS充分漂洗；滴加AntiDigAp抗體；NBT/BCIP室溫避光顯色4～6 h；0.05 mol/L PBS充分漂洗，終止顯色反應；中性樹膠封片。原位雜交染色結果的判定，以細胞漿和胞膜內出現明確的紫藍色細顆粒為陽性染色。無陽性信號(-)；弱陽性(+)，陽性細胞≤25%；弱陽性()，陽性細胞26%～50%；強陽性 ()，陽性細胞51%～75%；強陽性()，陽性細胞>75%。

1.4 免疫組織化學

所用的抗體bcl2為兔抗人單克隆抗體，購自加美國Santa Cruz公司，工作濃度1∶50；bax為兔抗人多克隆抗體，購自加美國Santa Cruz公司，工作濃度1∶30；生物素標記的二抗為羊抗兔多克隆抗體，購自武漢博士德公司，工作濃度1∶200。具體方法參見〔4〕。結果判定：背景無顏色，胞漿內著棕黃色顆粒為陽性細胞。無陽性信號(-)；弱陽性(+)，陽性細胞≤25%；弱陽性()，陽性細胞25%～50%；強陽性()，陽性細胞50%～75%；強陽性()，陽性細胞>75%。

1.5 統計學分析

實驗結果應用SPSS 12.0統計軟件進行統計學分析，組間率的比較用χ2檢驗。

2 結果

2.1 原位凋亡結果

熒光顯微鏡下可見低濃度CO組肺動脈組織有明顯的凋亡標記，而常氧組僅見很弱的熒光。正常對照組、低氧肺動脈高壓組、低濃度CO組的陽性率分別為8.1%，37.6%，76.5%三者差異顯著(P

2.2 原位雜交檢測結果

bax、bcl2 mRNA陽性細胞細胞漿和細胞膜著紫藍色顆粒，均勻著色，陽性細胞呈不均勻分布。正常對照組bax、bcl2雜交呈微弱的紫藍色，為弱陽性表達(+)。低氧PH組bax雜交呈中等強度的紫藍色，為弱陽性表達()，低濃度CO組呈極強的紫藍色，為強陽性表達()；但bcl2雜交，可見低氧PH組細胞胞漿呈強的紫藍色，為強陽性表達()，低濃度CO組呈微弱的紫藍色，為弱陽性表達(+)，見圖2。

2.3 免疫組織化學染色的情況

結果表明，正常對照組免疫組織化學染cl2、bax均很弱；低濃度CO組bcl2、bax均有升高，以bax為著 (78.9%)，與低氧PH組比較有顯著差異(P＜0.01)；低氧PH組bax雖然也有表達，但程度較弱，且bcl2表達處于優勢(80.0%)，與低濃度CO組比較有顯著差異(P＜0.01)。肺動脈凋亡主要發生在內皮細胞和平滑肌細胞，見圖2、表1、表2。表1 各組大鼠肺動脈bcl2凋亡的蛋白質表達情況，表2 各組大鼠肺動脈bax凋亡的蛋白質表達情況（略）。

3 討論

近年來，隨著細胞凋亡在肺動脈高壓研究中的不斷深入，人們已經注意到肺動脈高壓時，肺組織細胞可以細胞凋亡方式出現，并在發病中起到一定作用。bcl2被認為是細胞凋亡調控的最后通路之一，其屬于跨膜蛋白，主要分布于核膜、線粒體膜和內質網膜上。bcl2和bax同屬于bcl2家族，但二者功能相反，bcl2抑制凋亡的促進增殖，而bax促進細胞凋亡〔5〕。一般認為bcl2通過控制細胞核內外物質的運輸和抑制Ca2+的釋放或阻斷細胞內過氧化物的堆積而發揮抗凋亡作用。而bax作為bcl2的同源體，其作用是抑制bcl2作用，其與bcl2基因一樣在組織廣泛表達。bax與bcl2在細胞中的比例決定細胞是否發生凋亡，bax過量時，形成baxbax同二聚體，誘導細胞凋亡；bcl2過量時，形成bcl2異二聚體，抑制細胞凋亡〔6〕。機體在正常情況下bax與bcl2的處于平衡狀態，低氧或CO誘導情況下這種平衡往往被打破，使bax或 bcl2處于優勢地位，從而表現為凋亡或增殖。但是，外界因素對二者的影響非常復雜，同一因素對不同組織細胞的影向不盡相同〔7，8〕。本研究中低氧處理后肺動脈的bcl2基因表達水平顯著升高，bcl2蛋白質含量增加，而bax mRNA和蛋白質表達水平稍微升高，bcl2的基因表達處于優勢地位，這與以往的研究相一致〔9〕。可能的機制是形成了bax/bcl2異二聚體，從而抑制凋亡促進增殖。低濃度CO作用后，肺動脈的bcl2表達有所下降，bax顯著上升，說明低濃度CO可能通過上調bax，使其處于優勢地位，進而形成baxbax同二聚體，促進肺動脈組織的凋亡〔10〕。

以往研究表明增殖和凋亡現象共存在于低氧PH大鼠的肺血管細胞中〔11〕，也許bcl2和bax等基因的異常表達導致了細胞增殖和凋亡的失衡，進而調節了慢性低氧肺血管結構的改建。本實驗通過bcl2家族兩類功能相反基因bcl2和bax的研究，提示bcl2和bax表達可能參與了肺動脈組織的凋亡，bcl2和bax基因在低氧肺動脈表達程度對于評估PH患者的預后及指導臨床治療有一定意義。bax/bcl2對PH的調控非常復雜，許多問題有待探討，但利用多種手段在某一環節給予干預，下調bcl2或增強bax表達，將為PH治療開拓新思路。

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仰望大樹范文4

【摘要】 目的：探討低氧條件下HIF-1α及P53在大鼠視網膜的表達及相關性。方法：將大鼠56只隨機分為2組，每組各28只，分別飼養于常氧和50mL/L低氧倉。于飼養后0，2，6，8，12，24， 48h 各處死4只，分別進行光鏡，電鏡 ，免疫組化（SABC）測定HIF-1α及P53表達，并進行相關性分析。 結果: HIF-1α在缺氧后2h開始表達，8h達到高峰，12～24h持續強表達，48h表達明顯下降。P53在缺氧后2h開始表達，以后表達逐漸升高，24h后表達達到高峰，48h表達明顯下降。HIF-1α及P53在大鼠視網膜表達呈明顯正相關（R =0.902495）。電鏡結果顯示在視網膜缺氧6h視網膜超微結構開始變化，24h凋亡達到高峰。結論：低氧條件下HIF-1α及P53在大鼠視網膜均有表達，隨著HIF-1α的表達達到高峰后P53的表達達到高峰，兩者呈明顯正相關。P53表達達到高峰時電鏡結果顯示凋亡達到高峰。

【關鍵詞】 低氧誘導因子-1α P53 視網膜低氧 大鼠

0引言

低氧使細胞的生理功能發生改變，造成全身組織、器官失灌而損傷。 低氧誘導因子1(hypoxia inducible factor 1， HIF-1)是1992年由Semenza等發現的。HIF-1可調控促紅細胞生成素(EPO)、血管內皮生長因子(VEGF)、糖酵解酶等多種基因的表達。視網膜細胞代謝的最大特點是耗氧多，對缺氧特別敏感，目前沒有整體低氧情況下視網膜細胞HIF-1α表達的研究報道，也沒有HIF-lα參與低氧視網膜細胞凋亡的證據。我們研究大鼠視網膜細胞缺氧后不同時間的HIF-lα，P53的表達，應用免疫組織化學技術，對低氧情況下視網膜細胞內HIF-1α及P53的蛋白表達進行了定量分析，探討低氧環境下HIF-1α與P53的關系。并對視網膜超微結構進行電鏡觀察。

1材料和方法

1.1材料 常壓低氧模型有機玻璃制成低氧倉，體積100cm×60cm×60cm有機玻璃厚4cm，三氯甲烷封側面，以便開倉取換食物、水及取鼠。倉體上面開一直徑1 cm的出氣孔，側面開一直徑1cm的進氣孔。通過三通管分別按氮氣和壓縮空氣。用玻璃轉子流量計（沈陽市北量流量儀器廠）控制流量。成年Wistar大鼠56只，雌雄不限。中國醫科大學實驗動物學部提供，質量170～220g隨機分為2組，每組各28只，分別飼養于常氧環境，50mL/L低氧倉。于飼養后0，2，6，8，12，24，48h處死4只，分別進行光鏡，電鏡，免疫組化測定HIF-1α及P53表達。 兔抗鼠HIF-1α、P53抗體，免疫組化試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學實驗 大鼠處死后立即摘除眼球投入固定液（固定液配置：無水乙醇60mL，甲醇10mL 冰醋酸10mL，氯仿20mL）固定2h。室溫脫水，整個眼球投入600，700，800，900，950mL/L乙醇各10min取出眼球用鋒利刀片沿角膜兩側由后向前平行視軸剖切，包括角膜，晶狀體，視神經，然后投入無水乙醇10min。硬脂酸：蠟1（3:7）2h；硬脂酸：蠟2（2:8）1h；石蠟3h（熔點52℃）。石蠟包埋，切片染色浸蠟后的眼球水平面朝向包埋框底，用石蠟蜂蠟混合包埋，冷卻后切片機切片厚4μm。石蠟切片烤干，常規脫蠟至水，過氧化氫封閉阻斷內源性過氧化物酶，Hci進行抗原修復，羊血清封閉電荷，阻斷非特異性抗原抗體結合，棄去液體不洗。分別滴加一抗（HIF-1α抗體的工作濃度1：200，P53抗體的工作濃度1：200），4℃冰箱過夜。PBS(0.01mol/L pH7.2~7.4)洗后滴加FITC標記羊抗兔IgG(工作濃度1：1 000)，PBS沖洗，孵育，染色，DAB顯色，蘇木素復染，晾干，脫水，透明，封片PBS代替一抗做陰性對照。

1.2.2透射電鏡操作 大鼠處死后取眼球，20mL/L戊二醛浸泡至少2h，經前固定，清洗，后固定，脫水，浸透，包埋，超薄切片后檸檬酸鉛和醋酸鈉進行雙染色。觀察并攝片。細胞核或胞質中出現黃色或棕黃色顆粒為HIF-1α陽性表達細胞，細胞核或胞質中出現黃色或棕黃色顆粒為P53陽性表達細胞，無陽性反應為陰性。在40倍物鏡下攝取每組隨機選取的視網膜切片，每張隨機選取2個視野，轉入計算機用Metamorph軟件設定出陽性細胞閾值，并設定陽性框區。計算框區陽性細胞平均積分吸光度IOD值判定陽性細胞的表達情況。

統計學處理：分析軟件用SPSS 10.0。

2結果

2.1 HIF-1α及P53的表達 常氧條件下各時間點HIF-1α及P53的表達極為微弱，缺氧24h P53的免疫組化的照片可見節細胞層強表達，內顆粒層有表達，外顆粒層少有表達(圖1A)。缺氧8h HIF-1α免疫組化的照片可見節細胞層強表達，內顆粒層有表達，外顆粒層少量表達（圖1B）。 缺氧2h即出現HIF-1α表達，隨著時間延長表達逐漸增加。8h基本達到高峰，12～24h持續強表達，48h表達明顯下降。缺氧2h即出現P53表達，隨著時間延長表達逐漸增加。8h明顯表達增強，24h基本達到高峰，以后下降（表1)。缺氧條件下HIF-1α及P53表達呈曲線變化（圖2）。

圖1 缺氧后HIF-1α及P53的表達。A：缺氧24h P53的免疫組化的照片可見節細胞層強表達，內顆粒層有表達，外顆粒層少有表達；B：缺氧8hHIF-1α免疫組化的照片可見節細胞層強表達，內顆粒層有表達，外顆粒層少量表達

圖2 HIF-1α和P53表達的相關性圖示。由上圖得知HIF-1α和P53表達呈正相關（r =0.902495 ）

2.2電鏡結果 對照組光鏡下未見明顯異常，透射電鏡下各層組織區分明顯，細胞核仁明顯，居中，核膜清晰，細胞器較多，結構清楚。神經節細胞無變性，線粒體嵴存在，粗滑面內質網無變性，粗面內質網無脫顆粒，神經纖維無水腫，而隨著缺氧時間延長，6h出現超微結構變化，線粒體輕度膨脹，內質網有輕度擴張（圖3A），24h出現神經節細胞變性，線粒體明顯膨脹，嵴消失，滑面內質網擴張，粗面內質網脫顆粒擴張，內核層及內外叢狀層中線粒體膨脹，核仁靠近核膜，細胞有損傷的變化。神經纖維層軸突水腫加重，結構疏松，但視錐，視桿細胞較完整，（圖3B）。

圖3電鏡結果。A：缺氧6h后視網膜電鏡改變:線粒體輕度膨脹，內質網有輕度擴張TEM×5 000；B：缺氧24h視網膜電鏡改變:可見胞質空泡化，線粒體明顯膨脹，嵴消失，滑面內質網擴張，核仁靠近核膜，細胞有損傷的變化TEM×6 000

3討論

視網膜對缺氧極其敏感，缺氧能造成許多眼底疾病如糖尿病性視網膜病變[1]，視網膜中央靜脈阻塞(缺血型) ，視網膜中央動脈阻塞等，而細胞內氧的消耗主要功能是被細胞內線粒體的氧化磷酸化的過程所利用[2]，而且約10 %～15 %的細胞內一些酶的活動也需要氧分子參加，所以缺氧不僅導致細胞內線粒體氧化磷酸化的抑制，同時也將抑制細胞內一些需要氧的正常反應代謝過程。

HIF-1是在缺氧誘導的細胞核提取物中發現的一種DNA 結合蛋白，是被公認的缺氧調節中的重要因子。HIF-1是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動物和人體內的一種異源二聚體核轉錄因子，由α亞基(HIF-1α)和β亞基 (HIF-1β)組成。HIF-1α是唯一的O2調節亞單位，決定HIF -1α的活性， 通過對VEGF 等下游基因的調節而產生一系列代償反應，以適應低氧環境[3-5]。在常氧情況下HIF-1α半衰期小于1min，通過泛素、蛋白酶體途徑降解，缺氧降低泛素化或通過突變阻斷泛素化而增加HIF-1α的表達。HIF-1α與缺氧誘導因子抑制因子結合，而被降解；缺氧條件下，由于降解通路被阻斷，HIF-1α迅速與HIF-1β聚合形成有活性的HIF-1 二聚體，從而調節下游基因的表達。我們的研究發現，缺氧可以明顯增加大鼠視網膜神經細胞HIF-1蛋白的表達[6 ] 。并調控它的下游基因P53的表達，從本實驗看隨著HIF-1α的表達達到高峰后P53的表達達到高峰，兩者呈明顯正相關.

HIF-1α是機體生存必需的維持氧穩態的主要調節因子。從胚胎發育早期到成年期一直到衰老，HIF-1α精細地調節著許多生物反應。HIF-1α是機體生存必需的維持氧穩態的主要調節因子[7，8]。有研究表明氧濃度的改變，可以直接調控HIF-1α的活性，最近又發現MDM2泛素蛋白連接酶的識別靶標P53也能與HIF-1α亞基結合，從而介導HIF-1α亞基的降解。由于缺氧細胞中P53的表達升高，這樣即可避免HIF-1α亞基在缺氧條件下的過量積累[9]，又可激活結構域結合蛋白1，直接與HIF-1α亞基結合，抑制P53與HIF-1α亞基的結合，從而抑制P53對HIF-1α亞基穩定性的負調節，增加HIF-1α亞基的表達[10，11]。這樣P53與Jab1協同調節缺氧條件下HIF-1α亞基的表達，有效地避免了HIF-1α亞基的過量表達。從本實驗看隨著P53的表達達到高峰HIF-1α的表達逐漸降低，同以上觀點相符。由此可見P53和HIF-1α之間有著微妙的關系。

缺氧是P53最強的生理性誘導劑，缺氧情況下，去磷酸化的HIF-1α通過與P53結合可介導缺氧情況下P53依賴的凋亡[9]。P53也參加了HIF-1α的調節。本研究結果支持這一觀點。HIF-1α的表達與P53蛋白表達之間呈顯著正相關(r=0.902495)。該結果提示HIF-1α和P53可能協同參與了缺氧對視網膜神經細胞的調節，缺氧一方面使HIF-1α表達增加，提高視網膜能量代謝和血管生成，另一方面可能通過對P53的選擇，使視網膜神經細胞發生凋亡。通過電鏡可見凋亡高峰的出現同P53表達高峰的出現相符合。

本實驗只是對HIF-1α和P53的一個粗淺的研究，更深更細的研究有待于下一步進行。

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仰望大樹范文5

關鍵詞：教育技術學；計算機維護；網絡管理；能力培養

中圖分類號：TP434文獻標識碼：A文章編號：1672-7800（2013）006-0194-03

作者簡介：亓小濤（1978-），男，碩士，曲阜師范大學信息技術與傳播學院講師，研究方向為網絡與多媒體技術、數據庫技術。

1計算機維護與網絡管理能力培養的必要性

（1）是當今社會對所有大學生提出的必然要求。當前，計算機和網絡在社會中發揮著越來越重要的角色，已經成為人們學習、工作和生活中必不可少的重要工具。隨著整個社會對計算機和網絡依賴程度的不斷提高，人們逐漸意識到，由于計算機和網絡本身的缺點所帶來了一系列問題，不同程度地影響著我們的工作和學習。這些問題主要體現在：①計算機軟硬件系統以及相關其它硬件設備在使用過程中容易出現故障，如果處理不當可能會出現數據丟失等嚴重后果；②網絡是開放的，由于人們對網絡知識的缺乏，在人們使用網絡的過程中經常會遇到網絡不暢、病毒攻擊等問題。

因此，讓大學生在走上工作崗位前，進行計算機維護和網絡管理能力培養，學習相關知識，進行上機實驗操作，掌握計算機維護和網絡管理的基本方法，對于提高大學生計算機應用實踐能力，為以后的工作和學習打下良好的基礎具有十分重要的意義。大學生具備了這方面的知識和技能后，在工作中就能及時解決計算機和網絡帶來的相關問題，從而保障工作順利進行。

（2）是提高教育技術學畢業生就業競爭力的必然要求。近年來，教育技術學專業畢業生的流向主要包括以下幾個方面：中小學信息技術教師、高校現代教育技術公共課與專業課教師、中小學/大中專院校/各級電教館/政府的電教管理人員、影視制作及廣播電視新聞專業人員、企業公司員工（主要是IT產業中教育產品的開發人員）。經過親身的工作實踐體驗，絕大多數的教育技術學畢業生對自己都有了比較客觀的評價：①與計算機專業的畢業生相比有優勢也有劣勢。優勢是知識面廣、掌握教育技術等基本理論、有制作多媒體課件的能力，劣勢是計算機專業方面的知識（特別是硬件方面）、媒體資源開發技術掌握不夠全面；②在校時動手實踐太少，實際操作能力不強，知識掌握廣而不專、專而不精，工作中容易眼高手低；③在工作過程中感覺到計算機軟硬件維護、網絡管理等方面的知識相當欠缺。同時，對高校教育技術學專業培養和在校的教育技術學專業學生提出了中肯的建議：擴大專業口徑，培養全面的人才，學生所學知識要廣而專、專而精，特別要加強實踐應用能力和創新能力的培養。

由上可知，教育技術學專業畢業生，畢業后所從事的工作很多情況下都涉及到計算機維護和網絡管理等方面的內容。因此，給在校的教育技術學專業學生開設像“計算機維護與網絡管理”這樣的技術技能類課程，進行計算機維護和網絡管理能力培養是十分必要的。一方面，通過基礎理論知識的深入學習可以改變教育技術學專業學生存在的“廣而不專”的弱點；另一方面，通過上機實驗操作使學生真正掌握解決問題的思路和方法，提高其以后在工作中解決實際問題的能力。這樣，學生的核心能力加強了，在激烈的人才市場上具有較強的就業競爭力，在工作中具有更強的工作適應能力和解決問題的能力，就容易得到用人單位和社會的認可，從而為即將畢業的教育技術學專業學生創造一個更好的就業環境。

2計算機維護與網絡管理能力培養現狀及解決方案

目前，很多設有教育技術學專業的高校院系已經意識到計算機維護和網絡管理能力是畢業生走上工作崗位后的薄弱環節，開始有意識地加強這方面能力的培養，開展了相應的教學工作。在具體實踐中主要采用分散滲透和開設專門課程兩種方式。

分散滲透是指要求相關課程的老師能在教學中滲透計算機維護和網絡管理方面的理論與實踐知識內容。這種方式表面看起來省時省力，然而實際的情況是：整個培養目標被分散到了不同的課程中變成了一個個次要的分目標，教師在教學中涉及到這方面的知識時，往往只是簡單提及或不提，更不會設計相關實驗教學環節。這樣導致的結果是：一是學生可能學不到相關的知識，即使學到也沒有什么系統性和針對性，二是學生的動手能力得不到鍛煉，計算機維護和網絡管理能力培養變成了一句空話。顯然，分散滲透只能作為一種權宜之計。而開設專門的課程（制定明確教學目標、建立完善的理論教學與實驗內容體系）才是計算機維護和網絡管理能力培養的有效途徑。然而大多數高校院系并沒有為此開設專門的課程，因此，該課程能否在教育技術專業中開設、何時開設、課程的理論教學與實驗內容體系應包括哪些具體內容，就成為廣大教育工作者關注的首要問題。

計算機維護和網絡管理是一門綜合性很強的課程，它的開設要求學生有一定的基礎：了解計算機基本結構和工作原理、掌握計算機網絡的基礎理論知識和基礎應用操作（如TCP/IP設置），掌握相關軟件的基本操作方法。在大多數的高校院系中，教育技術專業的學生在前3年就已經學習了《計算機文化基礎》、《微機原理及應用》、《計算機網絡技術》等課程內容，并開設過一些類似的實驗，了解了計算機的軟硬件構成和功能、網絡軟硬件設備的類型和功能，具有較強的理論知識水平和一定的實踐操作能力，具備開展新實驗的知識積累和能力，能在此基礎上在教師的指導下掌握計算機維護與網絡管理相關的若干實驗的設計與操作方法。因此，教育技術學專業學生可以開設此課程，但不宜開設過早，建議在大四上學期開設為宜。

2007年8月，在對部分用人單位和近幾年的教育技術學畢業生充分調研的基礎上，我們為教育技術學專業的學生開設了《計算機維護與網絡管理》這門課程。近年來筆者對課程的定位、課程的理論和實驗教學內容體系進行了有益的探索和嘗試。

3能力培養課程的定位及內容需求分析

為避免該課程的體系結構過于龐大，出現廣而不專的老問題，在充分了解了近幾年教育技術學專業畢業生流向和工作內容的基礎上，將培養的對象主要定位在未來的信息技術教師、電教管理人員和在其它行業中從事計算機和網絡相關工作的人員等三類，同時兼顧將來從事其它非以上三類工作的教育技術學專業學生。

中小學的信息技術教師除了專門從事信息技術課程的教學工作和負責學校課件制作任務外，通常還兼有機房的管理和維護、學校網絡的管理與維護、學校網站的建設與維護等工作。有一部分在各級各類單位的電教管理人員和在其它行業中從事計算機維護和網絡管理的人員通常主要負責網絡的日常維護與管理、計算機的日常維護與管理以及為本單位提供技術支持等工作。由此可以看出，將來要從事以上三類工作的教育技術學專業學生必須掌握計算機軟硬件技術、局域網技術、Internet接入技術、各類網站構建與開發技術等，具有不同規模的網絡的設計管理與維護、計算機軟硬件日常維護、計算機及網絡的常見故障檢測與排除、網站的日常管理與維護等能力。另外，對于從事其它非以上三類工作的教育技術學專業學生來說，盡管從事的工作與計算機和網絡沒有什么關系，但是由于教育技術學專業本身的專業特點，往往會被單位和同事認為是精通計算機和網絡的高手，因此在工作中應具備計算機軟硬件日常維護、計算機及網絡的常見故障檢測與排除等基本能力。

4能力培養課程的理論和實驗教學內容體系構建

面對嚴峻的就業形勢，只有以“社會需求和就業”為導向，適時地調整課程設置，不斷更新課程與實驗教學內容、革新教學手段和教學方法，才能培養出社會適應需求的合格大學生。基于上面的分析，同時考慮到教育技術學的專業特點、學生的認知和知識結構特點，在綜合大量教材和參考書的基礎上，筆者從理論和實驗兩方面進行了積極的探索和實踐，經過幾年的反復教學實踐，構建了一個模塊化、分層次的課程內容體系，如表1所示。

課程體系共分為5個模塊，5個模塊呈現的是一個培養目標和能力要求不斷提高的分層式結構，各模塊相對獨立又相互聯系，如圖1所示。

每個模塊既有理論講授又有實踐操作，二者緊密結合，共培養學生5個方面的能力。理論教學內容注重理論聯系實際，使學生切實掌握解決實際問題的基本思路和方法，在授課中首先介紹與實驗相關的基本概念、原理和方法，然后進行演示實驗操作，最后結合日常應用進行分析、歸納與總結。實驗教學內容注重對學生實踐和創新能力的培養，許多實驗為綜合、設計性實驗，要求學生綜合應用基礎性實驗教學中所學的知識和所掌握的方法來完成，實驗指導書上只寫明實驗目標、要求，提供相關設備及部分相關資料，由學生自己設計實驗方案，確定實驗方法、步驟，利用實驗室提供的設備環境獨立完成整個實驗過程。

5能力培養課程體系的實踐驗證

上面構建的能力培養課程的理論和實驗教學內容體系，通過在教育技術學專業中幾年的反復教學實踐證明是一套較為科學的適合教育技術專業的內容體系結構。在實踐中，雖然該課程作為一門任意選修課開設的，但絕大多數學生都對該課程表現出了濃厚的興趣，每年學生的選課率都達到了95%以上。在授課過程中，注重對理論基礎知識的總結與回顧，加大了實驗環節的比重，著重加強學生的應用實踐能力和創新能力的培養，讓學生通過實驗教學親自動手設計與實踐，切實提高了學生解決實際問題的能力，達到了計算機維護與網絡管理能力培養的目標要求。

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仰望大樹范文6

【摘要】 目的 ：探討慢性間歇低氧對幼鼠海馬神經細胞凋亡及caspase-12表達的影響。方法：取體重為80～100 g健康雄性SPF級SD幼鼠(3～4周齡)40只，隨機分為間歇低氧2周(2IH)組、4周(4IH)組，空氣對照2周(2C)組、4周(4C)組，每組10只。以間歇低氧艙建立慢性間歇低氧幼鼠模型。采用TUNEL法檢測海馬神經細胞凋亡，RT-PCR檢測海馬區caspase-12 mRNA表達，免疫組織化學染色檢測海馬區caspase-12蛋白的表達。結果 ：間歇低氧組凋亡指數(AI)、caspase-12 mRNA及其蛋白表達均高于對照組(均P

【關鍵詞】 慢性間歇低氧;內質網應激;海馬;凋亡;caspase-12

Abstract: Objective: To explore the effect of chronic intermittent hypoxia on apoptosis of hippocampal cells and the expression of caspase-12 in immature rat’s. Methods: Forty male Sprague- Dawley rats (3～4 week，80～100 g) were randomly pided into four groups: 2-week intermittent hypoxia group (2IH)，4-week intermittent hypoxia group (4IH)，2-week control group with room air(2C) and 4-week control group with room air (4C)， and ten rats in each group. Intermittent hypoxia model was induced by an intermittent hypoxia cabin，the in situ cell apoptosis in the hippocampus was detected with TUNEL staining. The expressions of caspase-12mRNA in the hippocampus were examined with RT-PCR. Immunohistochemical SP method was used to examine the expression of caspase-12 in the hippocampus. Results: Both the apoptosis index (AI) and the expressions of caspase-12 in hippocampus of intermittent hypoxia group were significantly higher than those in control group (P

Key words: chronic intermittent hypoxia;endoplasmic reticulum stress;hippocampus; apoptosis;caspase-12

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obst-ructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)是兒童的常見病之一，發病率為1%～10%[1]，多見于學齡前兒童。OSAHS對全身各系統均有很大的影響，兒童以神經系統損害致學習記憶障礙危害最大。然而OSAHS引起學習記憶障礙的病理生理機制尚不明確。本實驗模擬OSAHS的典型病理生理特征，建立慢性間歇低氧的幼鼠模型，通過不同干預時間(2周、4周)，觀察幼鼠海馬神經細胞凋亡及凋亡相關因子caspase-12表達的變化，初步探討慢性間歇低氧幼鼠海馬神經細胞凋亡的可能機制。

1 材料和方法

1.1 主要材料 間歇低氧艙和空氣模擬對照艙自制。LKB2088型超薄切片機，TUNEL試劑盒(Roche公司)，梯度PCR儀(Effendorf公司)，RT-PCR試劑盒(Fermentas公司)，免疫組化試劑盒(北京中杉生物公司)，caspase-12抗體(CST公司)。

1.2 動物分組及模型制備 取八臂迷宮訓練成功的體重為80～100 g健康雄性SPF級SD幼鼠 (3～4周齡)40只，由溫州醫學院實驗動物中心提供，合格證號為[SYXK(浙)2005-0061]。按隨機數字表法分為間歇低氧2周組(2IH組)和4周組(4IH組)，空氣對照2周組(2C組)和4周組(4C組)，每組10只。OSAHS動物模型建立參照McGuire[2]、Gozal等[3]方法加以改進，2IH組及4IH組幼鼠置于常壓間歇低氧艙內。90 s為1次低氧-復氧循環，以0.3 kPa壓力通氮氣30 s，停30 s，25 L/min流量通氧氣12 s，停18 s，在停止通氣階段由連接的測氧儀分別測間歇低氧艙內的氧濃度高值、低值。低氧時氧濃度控制在7.8%左右，復氧時氧濃度控制在21.0%左右，CO2濃度始終

1.3 標本制作 低氧結束次日予戊巴比妥鈉(35 mg/kg體重)腹腔注射麻醉，每組隨機取1只幼鼠，仰臥固定，剖開胸腔，暴露心臟。將吸有預冷至0～4 ℃生理鹽水的針管刺入左心室，剖開右心耳排液，快速灌入100 mL左右的生理鹽水，再用200 mL左右預冷為0～4 ℃的4%戊二醛緩慢灌注后迅速取腦，取腦置于冰盤上，快速分離出左、右海馬。左側海馬置于液氮迅速冷凍，再放-70 ℃冰箱保存，用于RT-PCR檢測。右側海馬放入4%多聚甲醛中固定4 h，依次進行梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋，5μm厚連續切片，用于細胞凋亡及免疫組化檢測。

1.4 海馬神經細胞凋亡檢測 采用原位缺口末端標記(TUNEL)法，按試劑盒提供方法操作。鏡檢細胞核中有棕黃色顆粒者為凋亡細胞。隨機計算5個高倍視野(×400)下的凋亡細胞數。凋亡指數(apoptosis index，AI)以凋亡細胞/100個細胞(%)表示。

1.5 海馬區神經細胞caspase-12免疫組化表達 按照試劑盒說明書進行操作。在光學顯微鏡(40×10倍)下每張切片隨機觀察6個視野，利用Image-Pro Plus 6.0生物圖像處理系統處理檢測累積光密度(integrated optical density，IOD)，取平均值作為caspase-12相對含量。

1.6 海馬區caspase-12基因RT-PCR檢測 引物根據Genebank資料，利用primer 5.0引物設計軟件確定最優引物，然后經Blast匹對，由上海生工生物有限公司合成。引物：上游5’-GCCC TCATCATCTGCAACAA-3’下游5’-GACGGCCAGC AAACTTCATT-3’擴增片段172 bp，以看家基因GAPDH為內參照，進行RT-PCR反應，反應產物1%瓊脂糖凝膠上電泳，EB染色，圖像分析儀成像，并進行半定量分析。

1.7 統計學處理方法 組間比較采用單因素方差分析，方差齊者用LSD-t檢驗，方差不齊者用Tamhane’s T2檢驗。

2 結果

2.1 海馬神經細胞凋亡指數 2C組與4C組可見少許凋亡細胞(見圖1)，兩組間差異無顯著性，2IH與4IH組凋亡細胞較2C組和4C組明顯增多(均P

2.2 海馬區caspase-12 mRNA 2IH組較2C組表達上調(P

2.3 免疫組織化學檢測顯示 海馬神經細胞caspase-12免疫反應的產物呈棕黃色，主要表達于細胞胞漿，2C組與4C組可見散在神經細胞表達caspase-12，兩組間蛋白表達差異無顯著性(P >0.05)，2IH組與4IH組可見較多神經細胞表達caspase-12，4IH組累計光密度(IOD)較2IH組增高(P

3 討論

OSAHS特征性的低氧方式是慢性間歇低氧，這種低氧-復氧方式出現類似缺血/再灌注過程中的病理變化，導致腦損傷及海馬等處神經細胞凋亡[4]。我們前期實驗已證實慢性間歇低氧幼鼠海馬神經細胞電鏡下出現明顯的超微結構改變，提示細胞凋亡存在[5]，細胞內有精細復雜的途徑調控細胞凋亡過程，包括細胞內活性基因、酶和信號轉導途徑[6]。目前已知有3條主要的信號轉導通路來調控細胞凋亡：線粒體通路、死亡受體通路及內質網應激通路，其中內質網應激通路是近年來發現的一條新的細胞凋亡通路[7]，稱為內質網相關性死亡(ER-associated death，ERAD)途徑。ERAD途徑包含內質網應激誘導轉錄C/EBP的同源蛋白(C/EBP homologus protein，CHOP)、基因表達c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)的活化和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)蛋白水解酶的活化[8]。位于內質網側的caspase-12這條凋亡通路是內質網特異性的。當內質網應激發生時，caspase-12酶活性升高，然后活化的caspase-12從內質網轉運到胞漿，最終激活caspase-3等，最后引發細胞凋亡[9]。本實驗通過TUNEL檢測發現海馬神經細胞凋亡的數量隨著慢性間歇低氧時間的延長而增加，說明慢性間歇低氧環境下，海馬神經細胞的凋亡存在時間依賴性。本實驗顯示，慢性間歇低氧幼鼠海馬區caspase-12 mRNA及蛋白表達較對照組均明顯增高，且隨著間歇低氧時間的延長明顯增高，說明caspase-12介導的內質網應激信號通路參與了幼鼠慢性間歇低氧海馬神經細胞凋亡的調控。

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