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免疫學(xué)研究進展范文1

【關(guān)鍵詞】研究；應(yīng)用；免疫學(xué)檢驗；進展

伴隨著科技的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進步，免疫學(xué)檢驗技術(shù)有了突飛猛進的發(fā)展。從單一的免疫診斷技術(shù)發(fā)展為微量化、多基因和單細胞技術(shù)。而一些繼發(fā)性和原發(fā)性免疫缺陷及惡性腫瘤的臨床診斷，往往要求更加精確的免疫學(xué)檢驗技術(shù)，還能對臨床治療的有效性進行定量評價。

1免疫學(xué)檢驗技術(shù)的研究進展

1.1熒光素標(biāo)記抗體技術(shù)

1.1.1流式細胞免疫熒光分析技術(shù)這是一種新型的血清試驗方法，它是在免疫熒光基礎(chǔ)上建立起來的，對抗體利用熒光進行染色，并在此基礎(chǔ)上對所需信息進行獲取，進而研制而成的流式細胞儀。其特征是擁有電子計算機技術(shù)和激光技術(shù)，主要是用于分析DNA含量，可在同一試管中，對多種靶物質(zhì)的潛在特征進行檢測。目前這種技術(shù)盡管還沒有應(yīng)用于臨床上，但卻受到許多臨床檢驗學(xué)者的關(guān)注。

1.1.2間接免疫熒光技術(shù)主要是檢測呼吸道病原體抗體、抗平滑肌抗體和抗病原體，可使自動化程度和標(biāo)準化檢測提高，并使手工操作的誤差降低。這是一種相對成熟的技術(shù)，可用于商品的開發(fā)。

1.2酶標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)

1.2.1酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)在檢測酶聯(lián)免疫技術(shù)上，從理論上分析，相應(yīng)的抗體或者是某一抗原純品都可以進行應(yīng)用，所以在該技術(shù)的檢測上，抗體系統(tǒng)或者是可融性抗體都可以采納。這種技術(shù)是以免疫過氧化物為基礎(chǔ)，有較強的特異性、較高的敏感性，便于觀察、操作簡單，已經(jīng)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，利于進行大規(guī)模的檢查。

1.2.2酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)這是一種分析技術(shù)，應(yīng)用于對B細胞分泌免疫球蛋白的測定，是進一步衍伸和發(fā)展了定量酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)。微孔內(nèi)進入待檢測樣本后進行培養(yǎng)，在特異性抗原的作用下，對B細胞或者是記憶型T細胞進行活化，產(chǎn)生了IG或者是CK，清洗細胞之后，將第二抗體加入，IG或CK與抗體結(jié)合之后，在將酶生物素加入，發(fā)生反應(yīng)，而形成大小不一的圓形著色斑點。此技術(shù)即可用于各類CK的T細胞的分泌，還可用于抗體B細胞的分泌，這種技術(shù)也是檢測T細胞功能的標(biāo)準技術(shù)，其檢測靈敏度相當(dāng)高。

1.3新型標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)

1.3.1核酸標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)其原理是轉(zhuǎn)錄翻譯或者是擴增核酸。在極短的時間內(nèi)，通過聚合酶鏈反應(yīng)，按照幾何數(shù)在擴增，最終達到數(shù)百萬倍，這就是擴增。而轉(zhuǎn)錄翻譯是通過抗體DNA發(fā)生抗原反應(yīng)后，測定轉(zhuǎn)錄翻譯成的酶。靈敏性強是這兩種檢測方法的共同特征，目前，此種方法仍舊用于研究階段。

1.3.2量子點標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)在傳統(tǒng)的標(biāo)記免疫分析技術(shù)中，有較低的酶免疫分析靈敏度，同時有很大的污染存在于放射免疫分析中，而熒光免疫分析和發(fā)光免疫分析都有著較短的發(fā)光時間，很容易發(fā)生淬滅。而在20世紀70年代，科學(xué)家們就開始廣泛關(guān)注良好的光電性能，并開始初步應(yīng)用標(biāo)記免疫分析，其效果也非常令人滿意。量子由于有很小的尺寸，在受到刺激時，會發(fā)生熒光，所以它實際上是起到了探針的作用。在早期診斷疾病、細胞成像、測定生物多組分和免疫示蹤定位時，其應(yīng)用價值非常廣泛。

2其他免疫檢驗技術(shù)

2.1微陣列免疫芯片技術(shù)這是一種小分子抗原分析平臺，具有高效的特征，是近年來剛剛出現(xiàn)的，它可以對復(fù)雜樣品中含量極低的目標(biāo)物質(zhì)進行快速的定量檢測。同時，還可對生物樣品中全部蛋白質(zhì)含量的變化情況進行檢測。其優(yōu)點是能夠進行高通量的平行檢驗與分析，可使樣本或藥品的用量降低。

2.2液態(tài)芯片技術(shù)是新一代生物芯片技術(shù)，在20世紀70年代美國Luminex公司研制，其檢測平臺是流式細胞技術(shù)，其載體是帶編碼的微球體，可用于大規(guī)模的測定蛋白質(zhì)和核酸。還可用于檢測多種指標(biāo)，包括傳染病、神經(jīng)―內(nèi)分泌等，可用于測試任何使用微量分析的系統(tǒng)。

3免疫學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展趨勢

科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進步，要求能夠準確分析從特定部位取得的微量樣本。隨著微納電子學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展，在科研上免疫學(xué)檢驗技術(shù)也有了質(zhì)的飛躍，在此趨勢下，將不斷應(yīng)用各種更為敏感的新的分析方法，使免疫學(xué)檢驗技術(shù)朝著更新、更高的方向發(fā)展。

參考文獻

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[2]虞偉，武建國.ELIspot技術(shù)及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J].臨床檢驗雜志，2006，24（6）：476-477，479.

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免疫學(xué)研究進展范文2

關(guān)鍵詞：小兒哮喘；免疫學(xué)；發(fā)病機制

小兒哮喘是一種表現(xiàn)反復(fù)發(fā)作性咳嗽，喘鳴和呼吸困難，并伴有氣道高反應(yīng)性的可逆性、梗阻性呼吸道疾病，會嚴重危害兒童的身體健康，異常免疫反應(yīng)在發(fā)病中起著重要作用，其主要病理過程為氣道黏膜水腫，嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和中性粒細胞浸潤氣道，導(dǎo)致內(nèi)分泌物增多[1-2]。由于氣道有炎癥，使氣道高反應(yīng)性，細小支氣管管腔狹窄甚至閉塞，血清和氣道分泌物中總免疫球蛋白（IgE）和過敏原特異性IgE增高，該病理和病理生理改變的本質(zhì)是異常的免疫反應(yīng)。

1、遺傳學(xué)背景

哮喘為多基因遺傳病：其遺傳度高達77%，但環(huán)境因素僅占23%。通過結(jié)合DNA芯片技術(shù)與臨床表型關(guān)聯(lián)的分析得出：哮喘候選基因的篩選已被越來越多的人所關(guān)注。目前已發(fā)現(xiàn)11q與過敏體質(zhì)（atopy）有關(guān)，其控制總IgE和氣道高反應(yīng)性的基因位點位于染色體5q31成簇的細胞因子（IL-4，IL-13和IL-4受體）中。這些基因的突變導(dǎo)致細胞內(nèi)信息傳遞因子信息傳感和轉(zhuǎn)化活化劑-6（STAT6）活化[4]，促使atopy和哮喘的發(fā)生。而且β2受體的突變與哮喘有緊密的關(guān)系，位于14q的T細胞抗原受體（TCR）和特異性IgE反應(yīng)連鎖。由此可見，哮喘的發(fā)病和atopy的形成均具有遺傳背景.。然而近幾十年，哮喘的發(fā)病率卻在成倍的上升，這說明不僅僅是候選基因發(fā)生突變而導(dǎo)致的，主要原因是環(huán)境因素變化。此外，從已知的哮喘候選基因來看，均屬免疫因子的基因位點，這些基因多態(tài)性的表型（臨床表現(xiàn)）必然關(guān)系到免疫學(xué)改變[3]。

2、TH1/TH2 細胞功能失調(diào)

TH1 細胞的主要通過分泌IL-2和IFN- γ等細胞因子對抗細胞內(nèi)細菌及原蟲的免疫反應(yīng)，對誘發(fā)器官特異性自身免疫病、器官移植排斥反應(yīng)以及抗感染色疫中起面議調(diào)節(jié)作用，而TH2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13，能夠在誘發(fā)過敏反應(yīng)中調(diào)節(jié)體液免疫反應(yīng)，并輔助B細胞合成轉(zhuǎn)化免疫球蛋白，其中，分泌出的IL-4能夠促進IgE的合成，IL-5和IL-8能夠延長嗜酸性粒細胞在氣道內(nèi)的存活時間，所以，形成過敏體質(zhì)的基礎(chǔ)便是TH2的功能亢進[4]。

在一般情況下，TH1/ TH2細胞處于恒定狀態(tài)，二者功能發(fā)生變化時又會產(chǎn)生相互影響，例如當(dāng)哮喘患者TH1細胞功能下降時，TH2細胞的功能就反而增大，導(dǎo)致生成大量炎癥因子，IFN- γ水平降低，IL-4、IL-5水平升高，說明患者體內(nèi)TH1/ TH2功能失調(diào)，當(dāng)然，TH1細胞和TH2細胞的功能并不是相互獨立的，TH1/ TH2細胞起著相互抑制的作用，當(dāng)TH1內(nèi)的細胞因子IFN- γ拮抗TH2的IL-4和IL-10時，會導(dǎo)致TH2細胞的活性減弱，相反，當(dāng)TH2細胞內(nèi)的細胞因子IL-4和IL-10拮抗IL-2和IFN- γ時，TH1細胞的活性就會減弱。總免疫球蛋白會促進肥大細胞和嗜酸粒形細胞分化，進而形成以IgE為特征的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，即遲發(fā)型哮喘反應(yīng)。

從最近的小兒哮喘發(fā)病機制的研究結(jié)果：諸多哮喘患兒的體內(nèi)并不存在TH1細胞功能低下或者TH2細胞功能亢進的現(xiàn)象，由此表明，TH1/ TH2細胞失衡并不是導(dǎo)致小兒哮喘發(fā)病的唯一因素，還尚有其他亟待可知的機制參與。

3、TH2細胞引起免疫反應(yīng)

1、嗜酸性粒細胞（eosinophil） 嗜酸性粒細胞屬于白細胞，其具有粗大的嗜酸性顆粒，內(nèi)含有過氧化物酶和酸性磷酸酶，氣道全層會在TH2細胞內(nèi)的細胞因子IL-5和 IL-13的誘導(dǎo)下聚集大量嗜酸性粒細胞，從而釋放出炎癥介質(zhì)，主要有嗜酸細胞神經(jīng)毒蛋白、膠原酶、NO、以及血小板激活因子等。

2、免疫球蛋白（IgE） IgE是人體的一種抗體，存在于血中，可以引起I型超敏反應(yīng)，TH2細胞內(nèi)的細胞因子IL-4能夠促成lgE的合成，它與肥大細胞和嗜堿性粒細胞結(jié)合釋放出炎性介質(zhì)，從而產(chǎn)生免疫功能。

3、細胞黏附分子（CAM） 細胞黏附分子能夠通過介導(dǎo)白細胞與內(nèi)皮細胞及其他氣道結(jié)構(gòu)細胞的相互作用來調(diào)控白細胞在局部的聚集與歸巢等活動[2]，由于TH2內(nèi)細胞因子IL-6以及腫瘤壞死因子的刺激，導(dǎo)致炎癥細胞大量在氣道聚集。同時，血管細胞黏附因子、細胞間黏附分子、分泌因子都會到氣道參與聚集。

4、趨化因子（chemokines） 趨化因子在炎癥反應(yīng)中有著不可替代的作用，它能夠吸引白細胞移行到感染部位的一些低分子量趨化因子（多為8-10KD），同樣，嗜酸細胞活化趨化因子也會參與到炎癥細胞在氣道聚集。

5、內(nèi)皮素（Ets） 內(nèi)皮素存在于血管內(nèi)皮以及各種組織和細胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，能夠維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。其合成主要取決于巨噬細胞原炎癥因子和腫瘤壞死因子-α的調(diào)控。內(nèi)皮素不僅能夠有效收縮支氣管平滑肌，而且還能促進黏膜下腺體的分泌以及促使平滑肌合成纖維細胞的增殖。

4、樹突狀細胞（DC）

樹突狀細胞是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞，能高效地攝取、處理和遞呈抗原，自身有很強的免疫刺激能力，對小兒哮喘的發(fā)病機制起著至關(guān)重要的作用。其通常少量分布于與外部接觸的皮膚部位，DC主要分為髓樣DC（DCl）和淋巴樣DC（DC2），DCl分泌的IL-12和IL-18促使TH0細胞分化為TH1細胞，由于IL-4的刺激，TH0漸漸向TH2發(fā)育，同時IFN- γ的正反饋刺激DCl 使TH1分泌更多的IL-12，因而導(dǎo)致DCl功能不足，TH1/ TH2細胞功能失衡，很大程度上，會引起人的過敏反應(yīng)[5]。

DC有成熟狀態(tài)和未成熟狀態(tài)，在人體內(nèi)， DC大部分是非成熟狀態(tài)，未成熟DC有極強的抗原吞噬能力，在攝取抗原或受到外界因素刺激時就會分化為成熟DC，而成熟DC能有效激活初始型T細胞，近年來，人們越來越重視微環(huán)境因素對不成熟DC發(fā)育可能造成的影響，比如細胞因子。

最近研究表明又出現(xiàn)了低3種表型的DC[6]，即低分化DC，其吞噬功能很強，但分泌細胞因子的能力較弱，它與DC1、DC2不同的是，在提呈抗原的過程中并不會激活TH0細胞。由此看出，樹突狀細胞對小兒哮喘的發(fā)病具有關(guān)鍵作用。

5、免疫耐受現(xiàn)象

免疫耐受是指免疫活性細胞接觸抗原性物質(zhì)時所表現(xiàn)的一種特異性的無應(yīng)答狀態(tài)，如在抗原或過敏原刺激下，樹突狀細胞內(nèi)不成熟的DC能夠抑制氣道炎癥反應(yīng)。但準確機制尚不明，導(dǎo)致不成熟DC誘導(dǎo)T細胞的無能化，可能是由于它們之間缺少共刺激分子。

6、哮喘的發(fā)作與因素

哮喘發(fā)作的前兆便是出現(xiàn)過敏體質(zhì)，與TH2細胞不同，T細胞主要產(chǎn)生IL-10來抑制TH1細胞和TH2細胞，而TH3細胞主要分泌TGF-β來抑制炎癥的反應(yīng)，通過誘導(dǎo)共刺激分子，T細胞、TH3細胞由于與其配體的相互連接而被活化 ，從而導(dǎo)致細胞功能缺乏，免疫耐受狀態(tài)被破壞，便出現(xiàn)了過敏體質(zhì)。

由于近年來哮喘發(fā)病率急速上升[7]，隨之便出現(xiàn)了各種導(dǎo)致因素，感染便是其中之一，感染的抗哮喘機制是極其復(fù)雜的，通過toll樣受體細菌會促使TH1的發(fā)育，由于缺乏經(jīng)常性呼吸道感染的原因，導(dǎo)致TH1不能完全發(fā)育，使新生兒時期，TH2細胞的功能亢進發(fā)展迅速，便形成了過敏體質(zhì)。已有醫(yī)學(xué)證明鼻病毒、腺病毒、衣原體或支原體呼吸道感染也會導(dǎo)致哮喘的發(fā)作，但是也并不是所有的呼吸道感染都能誘發(fā)哮喘的發(fā)作。是否導(dǎo)致哮喘的發(fā)作取決于病原體的抗原成分，成分不同，可能誘發(fā)哮喘也可能抗哮喘，哮喘的發(fā)作與感染機會并沒有直接的關(guān)系。

7、哮喘的免疫學(xué)治療

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷更新，目前已研究出許多控制哮喘發(fā)作的方法，如氣道吸入糖皮質(zhì)激素、抗原特異性免疫療法以及LgE單克隆抗體治療等療法，但這些并不能從根本上治療哮喘，，如糖皮質(zhì)激素，它只能控制哮喘癥狀，必須持續(xù)用藥來預(yù)防復(fù)發(fā)。所以深入研哮喘發(fā)病機制探索出一種新的能夠抑制哮喘的發(fā)作的療法是有意義的。

由于哮喘發(fā)作的機制是免疫耐受被打破，所以想要研究出預(yù)防和治療哮喘的有效方法就需重建免疫耐受，增強免疫耐受的方法如下：

7.1益生態(tài)學(xué)治療：為激活黏膜免疫系統(tǒng)NOD2的活性來預(yù)防過敏性疾病的發(fā)生，可口服乳酸桿菌。

7.2抗原特異性免疫治療：通過反復(fù)接觸少量過敏原來調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答，使機體產(chǎn)生耐受性，當(dāng)機體再次接觸過敏原時，便可減少介質(zhì)釋放，減輕氣道炎癥，從而降低氣道反應(yīng)性。

7.3脫敏治療：脫敏治療有口服過敏原和皮下注射過敏原，為提高其特異性免疫耐受，可通過誘導(dǎo)IL-10來抑制IL-4的產(chǎn)生。皮下注射過敏原已廣泛應(yīng)用于小兒哮喘的臨床。

參考文獻：

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免疫學(xué)研究進展范文3

1 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的研究歷史背景

免疫分析的發(fā)展伴隨著抗體制備技術(shù)的改進而不斷提高。美國科學(xué)家Yalow等人首先將標(biāo)記技術(shù)引入免疫分析，他們首先用放射免疫分析法(RIA)進行測定胰島素。由于這種試驗方法限制了試劑的壽命，難以獲得長期穩(wěn)定的檢測標(biāo)準，同時由于存在同位素的使用，不僅會損害操作人員身體健康，也會帶來污物處理困難的問題。為了找到更為合理的免疫分析法成為以后20年來研究的熱點。直到70年代末，國外有學(xué)者將免疫反應(yīng)與化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)相結(jié)合，這種集高靈敏度和高特異性的技術(shù)稱之為化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)優(yōu)勢比較明顯，主要有以下幾點：第一，靈敏度高，檢測限范圍更精準;第二，自動化程度高，并且沒有放射性輻射危害;第三，發(fā)光標(biāo)記物穩(wěn)定，有效期長，同時應(yīng)用范圍寬，對于分子大小不同的抗原、半抗原及抗體都可檢測。因此，化學(xué)發(fā)光免疫分析在臨床、衛(wèi)生、食品、環(huán)保和軍事等領(lǐng)域正被越來越多地用于激素、蛋白質(zhì)、腫瘤、毒物、病毒等成分檢測。

2 免疫分析基本原理

由免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)兩個關(guān)鍵部分組成了化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理，化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)主要氧化以及催化的作用于化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，產(chǎn)生一個激發(fā)態(tài)的中間體，在處于穩(wěn)定狀態(tài)時，發(fā)射出光子，然后通過測量儀器測量光量子。通過標(biāo)記物與發(fā)光強度的關(guān)系，進而測出被測物質(zhì)含量。而免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)在抗原或抗體上直接標(biāo)記。

3 化學(xué)免疫分析分類

化學(xué)發(fā)光免疫分析法主要以標(biāo)記法的不同來進行分類，目前習(xí)慣上將免疫分析法主要分為兩類，第一主要是標(biāo)記免疫分析法，其次是酶免疫分析法，前者是以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，后者是以酶標(biāo)記，以化學(xué)發(fā)光底物作為信號試劑來進行發(fā)光，其原理是不相同的。除此之外，包括熒光免疫分析法以及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法也是目前存在的化學(xué)免疫法分析方法。

3.1 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析

將化學(xué)發(fā)光劑如吖啶酯類化合物，直接標(biāo)記在抗原上或抗體上，其基本原理是啟動發(fā)光劑發(fā)光，快速閃爍。這種標(biāo)記物其化學(xué)反應(yīng)簡單、快速、無須催化劑;夾心法用于大分子抗原，競爭法主要用于檢測小分子抗原，另外本底低，非特異性結(jié)合相對較少光量不會因為分子大小而受影響，因此能增加靈敏度，一般常用的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)主要是通過啟動發(fā)光試劑NaOH-H2O2作用而發(fā)光，其發(fā)光非常迅速，小分子物質(zhì)多采用競爭法，夾心法主要用于大分子物質(zhì)。

3.2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

通過酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)，再作用于發(fā)光底物，在信號劑的作用下發(fā)光，然后用發(fā)光測定儀進行測定。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，按照標(biāo)記免疫分析，應(yīng)屬酶免疫分析，其操作步驟與酶免分析完全相同。目前常用的標(biāo)記酶為堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶，它們有各自的發(fā)光底物。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法種類大致有三種，首先是HRP標(biāo)記CLEIA，一般常用3-氨基鄰苯二甲酰肼作為底物，也即是魯米諾或者用其衍生物4-氨基鄰苯二甲酰肼也是可以的，這兩種都是重要的發(fā)光試劑。需要注意的是該底物需要在堿性緩沖溶液中進行氧化反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)然這需要在過氧化物酶及活性氧存在的條件下進行，中間體回到基態(tài)時就可以發(fā)光，此時的波長一般在425nm。曾經(jīng)先前有人用該標(biāo)記底物標(biāo)記抗原或抗體，但后來發(fā)現(xiàn)其發(fā)光強度多受靈敏度的影響。目前用過氧化物酶進行標(biāo)記，其發(fā)光強度主要依賴酶免疫反應(yīng)中的酶的濃度大小;其次增強發(fā)光酶免疫分析也是化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的一種，它主要是在將增強的發(fā)光劑加入到發(fā)光系統(tǒng)中，加強發(fā)光的信號強度，并且能夠保持長時間的穩(wěn)定性，在一定程度上提高了該分析方法的準確性和靈敏度，便于多次測定。目前在一些現(xiàn)代化的設(shè)備上，還可以由計算機進行精確控制操作，比如，往系統(tǒng)中加入發(fā)光試劑以及混合、溫育、洗滌等，甚至后期的數(shù)據(jù)處理，進而繪制標(biāo)準曲線，最終完成患者血清樣品的分析并打印出結(jié)果;最后一種就是用ALP標(biāo)記的CLEIA，這種分析方法一般多用環(huán)-1，22-二氧乙烷衍生物作為發(fā)光底物，它的發(fā)光原理主要是其用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析底物而設(shè)計的分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)固，其中的芳香基作為發(fā)光基團和酶作用，在發(fā)光試劑的作用下發(fā)光，該底物在堿性磷酸酶的作用下，磷酸酯基發(fā)生水解而脫去一個磷酸基，就會產(chǎn)生一個穩(wěn)定的中間體，然后中間體發(fā)生裂解會產(chǎn)生金剛烷酮和激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，這種常見底物是AMPPD，其作為磷酸酯酶的直接化學(xué)發(fā)光底物，多用來檢測堿性磷酸酯酶和一些配基的結(jié)合物。

4 應(yīng)用

4.1 激素、蛋白質(zhì)和腫瘤檢測

該系統(tǒng)使反應(yīng)物形成均相混懸液，順磁微粒作為固定相，增大反應(yīng)面積，加速免疫反應(yīng)，快速分離，自動洗滌，減少酶和催化劑的使用，pH調(diào)整即可，避免了許多影響因素，廣泛應(yīng)用于甲狀腺功能、藥物檢測、腫瘤標(biāo)志物及心血管等項目。

4.2 病毒、毒物檢測

楊秀岑等用ABEI標(biāo)記兔抗大腸桿菌lgG，試樣溫育、離心、沉淀峰值用luminol-H2O2-NaOH 發(fā)光體系測定;章竹君等測定了糞樣中的輪狀病毒以HRP酶標(biāo)記;為研究TNT對人體的毒害作用提供方法，張麗民等以HRP標(biāo)記免疫測定了血清中4-氨基-2，6-二硝基甲苯，效果非常顯著。

4.3 其他方面的應(yīng)用

被越來越多地用于免疫測定中的HRP酶標(biāo)記生成核酸探針，主要采用兩種形式，一種是靶DNA雜交，將HRP直接標(biāo)記在探針上，同時增強的魯米諾試劑檢測加入分離后的雜交體。另外一種是將DNA探針標(biāo)記在生物素及地高辛上，然后與靶DNA雜交，再用HRP標(biāo)記的親和素和抗地高辛與分離后的雜交體結(jié)合，最后加入魯米諾試劑氧化發(fā)光。

免疫學(xué)研究進展范文4

進入21世紀以來， 細胞和分子免疫學(xué)研究有了新的突破。縱觀其發(fā)展過程， 我們不難發(fā)現(xiàn)， 每項重大的突破無不包含著新的分子（細胞因子、 膜受體、 轉(zhuǎn)錄因子）、 新的細胞亞群和新的免疫功能之間密切的聯(lián)系， 使我們從整體水平不斷深入地去認識免疫系統(tǒng)和功能及其復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)。

1 Foxp3和IL35是Treg發(fā)育和功能的關(guān)鍵功能分子

調(diào)節(jié)性T細胞（regulatory T cells， Treg）無疑是近10年來免疫學(xué)研究中的一個熱點。20世紀80年代， 在體內(nèi)外實驗的基礎(chǔ)， 提出了抑制性T淋巴細胞（suppressor T lymphocyte， Ts）概念， 認為Ts主要是CD8+的T細胞， 并且一度將Th/Ts比例的檢測作為判定機體免疫狀態(tài)的一個重要指標(biāo)。由于Ts缺乏明確的表面標(biāo)志， 無法獲得特異性表型的細胞亞群， Ts細胞的研究逐漸冷落下來。目前發(fā)現(xiàn)在CD8+細胞群中確有一個抑制性亞群， 這與最初Ts的概念并非相同。CD4+CD25+T細胞是一群具有抑制作用的Treg。根據(jù)其產(chǎn)生來源可分為來自于胸腺的天然發(fā)生的調(diào)節(jié)性T細胞（naturally occurring regulatory T cells， nTreg）和誘導(dǎo)性（或稱適應(yīng)性）調(diào)節(jié)性T細胞（induced regulatory T cells， iTreg）。Treg的研究迅速從基礎(chǔ)免疫學(xué)擴展到臨床免疫學(xué)， Treg與多種免疫性疾病的發(fā)病機制或免疫狀態(tài)密切相關(guān)， 并為自身免疫病、 過敏性疾病、 移植排斥、 腫瘤以及感染性疾病等疾病的治療提供了新的思路和策略。

Foxp3在Treg中， 無論是表型或者是功能都是一個關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子。Foxp3是forkhead/wingedhelix轉(zhuǎn)錄因子家族的一個成員， 能夠把Foxp3和Treg聯(lián)系在一起， 得益于一種動物疾病的模型， 即Foxp3基因發(fā)生突變（2個堿基的插入導(dǎo)致基因移碼突變）的Scurfy小鼠。隨后在人類發(fā)現(xiàn)了免疫調(diào)節(jié)障礙、 多種內(nèi)分泌病和腸病綜合征（IPEX）。由此得知， Foxp3在維持自身免疫耐受中發(fā)揮重要作用。Foxp3是Treg細胞一種最為關(guān)鍵的表型， 更重要的是， Foxp3調(diào)節(jié)的靶分子如Smad7、 IL35中的EBI3亞單位等與Treg的負調(diào)控功能相關(guān)。以往認為， Treg發(fā)揮負調(diào)控的分子機制可能是通過與靶細胞的直接接觸（如Treg膜表面膜型TGFβ、 CTLA4和GITR分子）和分泌抑制性的細胞因子如TGFβ和IL10來發(fā)揮作用的。新近， Vignali和Liew兩個小組發(fā)表了有關(guān)IL35的論文， 并初步證明IL35主要由Treg分泌， 是Treg發(fā)揮免疫負調(diào)控的效應(yīng)分子[1]。IL35是IL12家族中的一個新的成員， 是由p35（同IL12共有亞單位）和EBI3（與IL27共有亞單位）所組成。在體外， 當(dāng)Treg與效應(yīng)T細胞共培養(yǎng)時， Treg中IL35基因表達上調(diào)。目前已知， EBI3是Treg細胞中Foxp3轉(zhuǎn)錄因子作用的下游靶分子。IL35可促進CD3 mAb+CD28 mAb誘導(dǎo)小鼠CD4+T細胞的增殖， 包括具有抑制作用的CD4+CD25+ Foxp3 Treg和 CD4+CD25-T細胞亞群。在其他不同的條件下， 如CD3 mAb+APC活化T細胞， 或OVA肽段刺激轉(zhuǎn)基因小鼠OVA特異性CD4+CD25-T細胞增殖中， IL35則有很強的抑制作用。IL35另一個重要功能是體內(nèi)和體外均可抑制Th17的分化及其IL17的產(chǎn)生， 可明顯降低小鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的病情。缺失Ebi3和IL12a基因（分別編碼EBI3和IL12p35亞單位）的Treg喪失對效應(yīng)T細胞的抑制能力， 也不能有效治愈動物模型中小鼠炎癥性腸炎。IL35成為繼TGFβ和IL10后一種新的抗炎細胞因子， 可能成為治療腫瘤、 感染性疾病（如HCV）和自身免疫病的靶點。目前有關(guān)IL35的受體及其信號途徑還不清楚。

2 IL17家族和Th17細胞

一個新的細胞因子家族的發(fā)現(xiàn)， 明確了一個新的T細胞亞群的存在。IL17A/CTLA8最初于1993年發(fā)現(xiàn)。IL17及其受體的結(jié)構(gòu)不同于已發(fā)現(xiàn)其他細胞因子和受體。IL17家族有6個成員IL17A、 IL17B、 IL17C、 IL17D、 IL17E/IL25和IL17F， 其中人IL17A和IL17F基因都位于6p12， 兩者同源性最高， 并且結(jié)合相同的受體IL17RA。尤其重要的是只有IL17A/F是由Th17細胞所分泌， 而IL17家族其他成員與Th17細胞的表型和功能無明顯關(guān)系（表1）。

表1 人IL17家庭成員及其特征（略）

*IL17F兩種異型與IL17A同源性程度不同.

Th17細胞是近年來免疫學(xué)研究另一個熱點。Th17是繼1986年發(fā)現(xiàn)Th1/Th2效應(yīng)細胞亞群以來， 出現(xiàn)的第三類效應(yīng)性T細胞。在小鼠， TGFβ和IL6共同誘導(dǎo)初始T細胞分化為Th17[2， 3]， 而單獨TGFβ則誘導(dǎo)初始T細胞分化為Treg。Th17所分泌的IL17主要作用于非造血細胞（圖1）， 因此IL17A/F成為連接適應(yīng)性免疫和固有性免疫重要的橋梁。由于IL17介導(dǎo)炎癥性反應(yīng)， 可能是多種自身免疫性疾病（如銀屑病、 炎癥性腸炎、 多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等）重要的致病環(huán)節(jié)， 也成為治療這些疾病的靶分子。

圖1 Th17細胞介導(dǎo)的促炎作用（略）

3 IL12家族與CD4+T細胞分化

目前所知， IL12家族有4個成員: IL12、 IL23、 IL27和IL35， 其結(jié)構(gòu)和受體見圖2。其中IL12、 IL23和IL27主要由樹突狀細胞和單核巨噬細胞以及EBV轉(zhuǎn)化的B淋巴母細胞產(chǎn)生; 而IL35主要由Tre生。此外， EBV轉(zhuǎn)化的B細胞和胎盤也可產(chǎn)生。

圖2 IL12家族和IL12受體家族的結(jié)構(gòu)（略）

APC細胞接觸抗原性質(zhì)以及活化的環(huán)境不同， 在很大的程度上決定其分泌不同IL12家族成員， 參與不同CD4+T細胞的分化。IL12是Th1分化的關(guān)鍵細胞因子，IL27是Th1分化的協(xié)同因子; IL23對于Th17維持存活和擴增發(fā)揮重要作用; 而IL35則由Treg分泌， 不僅是Treg發(fā)揮負調(diào)控的重要細胞因子， 也參與Treg的分化（圖3）。如此看來， 以DC為主要代表的APC細胞對于適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié)可以從兩個層面去認識: 一是加工提呈抗原， 激活初始T細胞; 另一方面， 根據(jù)其接觸抗原的性質(zhì)不同（尤其是病原微生物）， 通過分泌不同的IL12家族成員以及其他的細胞因子， 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)發(fā)揮相應(yīng)的免疫應(yīng)答， 從而最有效地清除相應(yīng)的病原生物等抗原。Th1介導(dǎo)的細胞免疫清除胞內(nèi)感染細菌， Th2介導(dǎo)的體液免疫介導(dǎo)抗蠕蟲和抗菌免疫， Th17/IL17介導(dǎo)的固有免疫如中性粒細胞以及角朊細胞合成β防御素等多種抗菌肽， 可抵御真菌、 細菌和病毒的感染。

圖3 小鼠CD4+效應(yīng)及調(diào)節(jié)性T細胞亞群的分化（略）

4 結(jié)語

CD4+T細胞亞群可分為效應(yīng)T細胞和調(diào)節(jié)性T細胞兩類。Th17是效應(yīng)性T細胞中新的一員， 其分泌的IL17主要作用于非造血細胞， 參與固有免疫。IL35是新近發(fā)現(xiàn)的Treg的效應(yīng)分子， 參與對其他CD4+T細胞亞群的負調(diào)控作用。IL12家族的研究日益受到重視， 其不同成員分別對不同CD4+T細胞的分化發(fā)揮關(guān)鍵作用。

參考文獻

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免疫學(xué)研究進展范文5

關(guān)鍵詞：自然殺傷T細胞 肝臟疾病 治療 進展 前景

Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.02.061

【中圖分類號】R4 【文獻標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）02-0054-01

NKT細胞可使免疫反應(yīng)增強，同時能夠?qū)γ庖叻磻?yīng)進行抑制，在抗感染、抗腫瘤、抑制自身免疫等疾病中有重要作用[1]。為此，本文從NKT細胞的抗原識別與活化、NKT細胞在肝臟疾病中的研究、NKT細胞在肝臟疾病治療中的前景等方面進行了綜述，現(xiàn)匯報如下。

1 NKT細胞的抗原識別與活化

NKT細胞的抗原識別不能夠?qū)?jīng)典的MHC-Ⅰ、Ⅱ類分子提呈的抗原肽進行識別，單純對細胞表面CD1d分子提呈的糖脂類抗原進行識別。CD1分子分成CD1a、CD1b、CD1c、CD1d四類，并將CD1a、CD1b、CD1c劃分在Ⅰ類，而CD1d則為Ⅱ類。

2 NKT細胞在肝臟疾病中的研究

肝臟的天然免疫反應(yīng)可對病毒、腸內(nèi)寄生菌、惡性轉(zhuǎn)化細胞等的侵害產(chǎn)生抵御作用。NKT細胞在肝臟內(nèi)的含量較高，在肝臟T淋巴細胞總數(shù)中約占20%-30%左右，可見NKT細胞在肝臟局部免疫中占有重要地位[2]。

2.1 NKT細胞與肝炎。NKT細胞在肝炎發(fā)生中承擔(dān)著免疫清除和監(jiān)視作用，且可對肝細胞產(chǎn)生損傷。肝臟內(nèi)的NKT細胞可以被a-GaCer活化，病毒性肝炎活化后的NKT細胞會產(chǎn)生IFN-γ，對HBV復(fù)制進行有效抑制；活化NKT細胞產(chǎn)生的IFN-γ會使NK細胞激活，經(jīng)NK細胞可產(chǎn)生大量細胞因子，且大量動員后續(xù)獲得性免疫細胞，產(chǎn)生NKT細胞而抑制HBV復(fù)制，實現(xiàn)抗毒效果[3]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[4]，丙型肝炎患者肝組織學(xué)活動指數(shù)得分高者的NKT細胞數(shù)較肝組織學(xué)活動指數(shù)低者高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.2 NKT細胞與肝臟腫瘤。諸多研究顯示[5]，NKT細胞在動物模型腫瘤免疫中發(fā)揮了重要的作用。曾有學(xué)者經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)[6]，在原發(fā)性肝細胞癌患鼠肝臟內(nèi)NKT細胞數(shù)量發(fā)生了顯著增加，并且CD8+/CD4+淋巴細胞比率也名增加，經(jīng)分析其可能是受到NKT細胞與CD8+/CD4+淋巴細胞分泌參與抗腫瘤反應(yīng)的IFN-γ的影響，進而利用IFN-γ作用對肝腫瘤生長進行抑制。

除以上途徑外，NKT細胞會利用穿孔蛋白途徑發(fā)揮抗腫瘤作用[7]。研究顯示[8]抗-FasFasL、抗-Vβ8、抗-NK1.1、抗IFN-γ以及抗-CD1d等均無法對NKT細胞介導(dǎo)的抗腫瘤細胞毒作用產(chǎn)生阻斷作用，然而對穿孔蛋白活性進行抑制，便可以阻斷該細胞毒作用。

大量研究顯示[9]，NKT細胞具有顯著的抗腫瘤與抗腫瘤轉(zhuǎn)移效果。肝臟腫瘤患者的肝臟或腫瘤組織中NKT細胞數(shù)量的改變可以對肝臟局部免疫狀態(tài)進行反映，從而證實了NKT細胞與肝臟腫瘤的發(fā)生與發(fā)展之間的關(guān)系，在今后的研究中應(yīng)對其給予重視。

3 NKT細胞在肝臟疾病治療中的前景

研究發(fā)現(xiàn)[10]，過量免疫細胞浸潤會導(dǎo)致須知損傷或者是新的破壞，因此對握治療性NKT細胞數(shù)量進行控制，達到治療效果的同時實現(xiàn)降低傷害到最低為一個關(guān)鍵問題。隨著對NKT細胞認識不斷深入，NKT細胞免疫學(xué)療法在肝臟疾病治療中不斷獲得完善已成為可能，其將會為肝臟疾病的治療開辟一條嶄新的領(lǐng)域。

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免疫學(xué)研究進展范文6

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