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凝膠滲透色譜范文1
關(guān)鍵詞 凝膠滲透色譜 凈化 溶劑消耗量 農(nóng)殘
概 述
凝膠滲透色譜（gel permeation chromatography，簡(jiǎn)稱GPC）技術(shù)是一種相對(duì)分子質(zhì)量及其分布的快速測(cè)定方法，其分離原理基于體積排阻，按照化合物的分子量不同從大到小順序出峰。GPC應(yīng)用范圍逐步從生物化學(xué)、高分子化學(xué)、無機(jī)化學(xué)向其他領(lǐng)域滲透，目前已成為國(guó)際公認(rèn)的農(nóng)殘分析中有效的凈化手段，被列入多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)中，如《AOAC Method No.984.21 動(dòng)物脂肪中的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)》、《EN 12393食品中農(nóng)藥多殘留檢測(cè) 氣相色譜法》、《GB/T 19650-2006 動(dòng)物肌肉中478種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法》等。GPC技術(shù)對(duì)于含大分子油脂、色素的樣品凈化十分有效，并且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作，可大大縮短樣品前處理操作時(shí)間和減輕繁雜的手工勞動(dòng)[1]。
目前，GPC凈化技術(shù)在有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯以及農(nóng)藥多殘留分析中的應(yīng)用十分廣泛[2～8]，商品化全自動(dòng)GPC凈化儀器也已經(jīng)得到發(fā)展，但是在實(shí)際應(yīng)用中往往受到限制，除儀器設(shè)備成本之外，溶劑用量大是GPC應(yīng)用的最大問題[9]。在常規(guī)GPC凈化方法中，為獲得足夠靈敏度，往往采用較大規(guī)格凈化柱（柱直徑一般在2.5cm左右），以承受更大的進(jìn)樣量（一般為5mL）。獲得洗脫液之后，再經(jīng)過濃縮步驟，才得到待測(cè)樣品溶液。雖然增大進(jìn)樣量有助于提高檢測(cè)方法靈敏度，但洗脫溶劑量消耗也大大增加。一般來說單個(gè)樣品處理時(shí)間約為40min（其中凈化收集時(shí)間約為18～20min），按流速5mL/min計(jì)算，需消耗200mL洗脫溶劑。本文針對(duì)以上實(shí)際問題，采用小型化凈化柱，優(yōu)化洗脫條件，建立一套更為經(jīng)濟(jì)合理、環(huán)保的凈化方法。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 儀器與試劑
JMS-Q1000GC氣質(zhì)聯(lián)用儀，配有電子轟擊源（EI）（日本電子株式會(huì)社）； FA2004電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；T25分散機(jī)（德國(guó)IKA）；TGL-16-A離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器有限公司）；MTN-2800D氮吹儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；GPC樣品前處理設(shè)備（自制）。
乙腈：色譜純；環(huán)己烷：色譜純；乙酸乙酯：色譜純；無水硫酸鈉：分析純；氯化鈉：分析純；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：敵敵畏、β-六六六、毒死蜱、丙草胺、溴氰菊酯、環(huán)氧七氯（J&K Scientific Ltd.）。
1.2 樣品提取
稱取20g試樣（精確至0.01g），放于燒杯中，加入40mL乙腈-乙酸乙酯（1：1）混合溶液，用均質(zhì)器在15000r/min均質(zhì)提取1min；加入5g氯化鈉和5g無水硫酸鈉，再均質(zhì)提取1min；將提取液轉(zhuǎn)移至離心管中，放入離心機(jī)，6000r/min離心5min；取上清液20mL，氮吹濃縮至5mL，待凈化。
1.3 GPC凈化條件
凈化柱：Shodex CLNpak EV-200（2.0mm×150mm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流動(dòng)相：環(huán)己烷-乙酸乙酯（1：1）；流速：0.1mL/min；進(jìn)樣量：20μL；開始收集時(shí)間：2.9min；結(jié)束收集時(shí)間：4.9min。得到樣品體積200μL，加入5μL環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)液（300μg/mL），作為待測(cè)樣品溶液。采用GC-MS進(jìn)行后續(xù)分析檢測(cè)。
2 結(jié)果與討論
2.1 測(cè)試樣品選擇
由于GPC凈化是基于體積排阻原理，因此在測(cè)試凈化效果時(shí)，選取分子量差異較大的農(nóng)藥品種，包括敵敵畏（分子量220.98）、溴氰菊酯（分子量505.24）。為驗(yàn)證該方法對(duì)不同類型農(nóng)藥殘留的凈化效果，選取測(cè)試樣品：有機(jī)氯類農(nóng)藥（β-六六六）、有機(jī)磷類農(nóng)藥（敵敵畏、毒死蜱）、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥（溴氰菊酯）、除草劑（丙草胺），涵蓋GC-MS能檢測(cè)的絕大部分農(nóng)藥類型。
2.2 提取溶劑優(yōu)化
在多農(nóng)殘檢測(cè)中，最常用的溶劑是乙腈；GPC凈化所使用的溶劑通常為環(huán)己烷-丙酮或環(huán)己烷-乙酸乙酯，兩者極性差異大。為此，對(duì)提取溶劑進(jìn)行優(yōu)化。比較乙腈和乙腈-乙酸乙酯（1：1）提取效果，對(duì)于選取的5種農(nóng)殘，兩者沒有顯著差異（見表1），乙腈-乙酸乙酯（1：1）提取回收率稍微高于乙腈提取回收率。考慮到后續(xù)凈化GPC所用溶劑的兼容性，選用乙腈-乙酸乙酯（1：1）作為樣品提取溶劑。
2.3 凈化柱選擇和條件優(yōu)化
常規(guī)使用凈化柱內(nèi)徑為2.5cm，流速5mL/min，收集時(shí)間22～40min，每個(gè)樣品消耗溶劑至少200mL，處理1個(gè)樣品的時(shí)間在40min以上，不僅耗時(shí)，且溶劑消耗量大，還需要進(jìn)行后續(xù)濃縮處理。而GPC凈化柱規(guī)格為2.0mm× 150mm，可在流速0.07～0.1mL/min下使用，收集時(shí)間為2～8min，凈化每個(gè)樣品所需時(shí)間在10min以內(nèi)。除提高工作效率、縮短凈化時(shí)間以外，還可達(dá)到節(jié)省溶劑、環(huán)保的效果（見表2），檢測(cè)限也能滿足目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[10]，可用于日常檢測(cè)。
GPC凈化常用流動(dòng)相為環(huán)己烷-乙酸乙酯和環(huán)己烷-丙酮，對(duì)這2種混合溶劑的凈化效果進(jìn)樣考察，均獲得較好效果。考慮到與提取溶劑的兼容性，選擇環(huán)己烷-乙酸乙酯作為凈化流動(dòng)相。流動(dòng)相比例對(duì)雜質(zhì)和目標(biāo)物的分離有一定影響，提高乙酸乙酯比例可縮短目標(biāo)物出峰時(shí)間，減小收集餾分體積，有利于達(dá)到較低的檢出限。所以選擇環(huán)己烷-乙酸乙酯（1：1）作為流動(dòng)相，得到的樣品溶液經(jīng)GC-MS分析。凈化前后的效果（見圖1）。
2.4 方法重現(xiàn)性及加標(biāo)回收率
在已知含量的樣品中添加一定量標(biāo)準(zhǔn)品，按上述前處理方法制備，平行制備3份，GC-MS分析，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（見表3）。
2.5 檢測(cè)限
按2倍信噪比計(jì)算最低檢測(cè)限，以蘋果樣品為例，檢測(cè)限分別為：β-六六六0.0105mg/kg，敵敵畏0.0042
mg/kg，毒死蜱0.0062mg/kg，溴氰菊酯0.0367mg/kg，丙草胺0.0113mg/kg。
2.6 實(shí)際樣品測(cè)定
從市場(chǎng)上購(gòu)買菠菜和胡蘿卜，采用本方法進(jìn)行分析檢測(cè)，含量測(cè)定及加標(biāo)回收率的結(jié)果（見表4）。
3 結(jié)論
本方法采用自制GPC凈化設(shè)備，凈化處理單個(gè)樣品時(shí)間在10min以內(nèi)，溶劑用量不到常規(guī)GPC消耗量的10%，樣品處理效率提高2～4倍，解決常規(guī)GPC凈化應(yīng)用中溶劑消耗量大的實(shí)際問題，可達(dá)到更為環(huán)保的效果。自制GPC凈化設(shè)備運(yùn)用于農(nóng)殘檢測(cè)前處理中，并對(duì)其在農(nóng)殘檢測(cè)中實(shí)際應(yīng)用的效果進(jìn)行考察，效果令人滿意。
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凝膠滲透色譜范文2
【關(guān)鍵詞】紅外光譜；凝膠色譜；聚羧酸減水劑
The application of micro equipments in analysing polycarboxylate high preformace water reducer
Wang Lei,Chi Pei-yun,Yang Pei-dong,Niu chang-hui
(School of Architecture and Civil Engineering, Qingdao Technological UnivercityQingdaoShandong266033)
【Abstract】High performance water reducing agent especially polycarboxylate water reducer has increasingly been come under recognition because of its remarkable water-reducing ability and slump retention ect. And micro test methords lay an important foundation and server a supporting power for exploring new kinds of polycarboxylate water reducer. In this paper, detailed discription has been made about the priciple of infrared spectorscopy technology and its application in detecting functional groups of polycarboxylic acid, and priciple of Gel permeation Chormtography techonlogy and its using in calculating molecular weight and molecular weight distribution of polycarboxylate water reducer is also been systematically introduced.
【Key words】 Infrared spectorscopy;Gel permeation Chromtography technology;Polycarboxylate water reducer
1. 紅外光譜分析（infrared spectrum analysis）
1.1紅外光譜分析原理
當(dāng)PC樣品受到頻率連續(xù)變化的紅外光照射時(shí)，分子會(huì)吸收與其振動(dòng)頻率一樣的紅外光波使其從振動(dòng)――轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，相應(yīng)與這些區(qū)域的投射光波強(qiáng)度就會(huì)降低，記錄百分透過率他T%對(duì)波數(shù)或波長(zhǎng)的曲線即可得到PC樣品的紅外光譜。由于聚合物中的官能團(tuán)的紅外光譜特征吸收峰總是在一定范圍之內(nèi)變動(dòng)，因此通過分析PC樣品的紅外光譜即可得出該聚合物所含有的官能團(tuán)。下表1為PC減水劑中常見官能團(tuán)的特征吸收峰。
1.2實(shí)驗(yàn)及分析。
1.2.1實(shí)驗(yàn)儀器和樣品制備。
（1）實(shí)驗(yàn)儀器。
傅里葉交換紅外光譜儀，德國(guó)bruker公司，分辨率優(yōu)于0.09cm-1，光譜范圍12500～50cm-1。
（2）試樣制備。
采用薄膜法制樣，樣品先經(jīng)過異丙醇和丙酮的分離，然后將PC溶液倒入到低沸點(diǎn)（5～8倍）溶劑中反復(fù)沉淀，在60℃濃縮一定時(shí)間后再真空抽濾，除去水分然后涂抹在NaCl鹽片上成膜。
1.2.2圖譜分析。
下圖1為兩種聚羧酸減水劑MPC-1和MPC-2的紅外圖譜，通過分析紅外光譜結(jié)合減水劑中各基團(tuán)特征峰的位置，可以看到MPC-1和MPC-2有相似的結(jié)構(gòu) 3300，2850，1725，1575，1460，1350，1280，1107，951，845，622及523cm-1等波數(shù)附近都有 吸收峰，可見這兩種減水劑分子結(jié)構(gòu)上具有磺酸基，羧基，聚氧化乙烯基，酯基和羥基等基團(tuán)。由于MPC-1比MPC-2具有更長(zhǎng)的聚氧化乙烯基長(zhǎng)鏈，因此其在 1120～1110 cm-1之間有更寬闊的吸收峰，隨著環(huán)氧乙烷加成數(shù)增加，在1105 cm-1的吸收帶也隨之增強(qiáng)，O-H基團(tuán)的伸縮振動(dòng)在3300～2500 cm-1范圍處出現(xiàn)，酯基的吸收峰出現(xiàn)在了1725 cm-1處，羧酸衍生物的水解羧基C=O對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收峰在1563 cm-1和1430 cm-1處生成，硫酸酯吸收峰可以在1230 cm-1處找到，而磺酸基S-O伸縮振動(dòng)的吸收峰出現(xiàn)在1220 cm-1，1105 cm-1和1045 cm-1處出現(xiàn)。
圖1聚羧酸減水劑MPC-1和MPC-2的紅外光譜
2. 凝膠滲透色譜分析
聚合物分子量具有多分散性，不同的聚合方法、聚合工藝會(huì)使聚合物具有不同的分子量和分子量分布。分子量和分子量分布對(duì)PC減水劑的性能有十分密切的關(guān)系，因此測(cè)定其分子量和分子量分布就顯得尤為重要。通過人們不斷探索，改進(jìn)和創(chuàng)新測(cè)定分子量和分子量分布的方法，凝膠色譜法在60年代末應(yīng)運(yùn)而生并成為現(xiàn)今最有效的分子量和分子量分布的測(cè)試方法。
2.1凝膠滲透色譜原理。
凝膠滲透色譜（Gel Permeation Chromatography，簡(jiǎn)稱GPC）是對(duì)同一聚合物種不同分子量的高分子組份進(jìn)行分離。當(dāng)樣品中不同分子量的各組份的分子量和含量被確定后，就可得到聚合物的分子量分布，然后可以很方便地對(duì)分子量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得到各種平均值。一般認(rèn)為，GPC是根據(jù)溶質(zhì)體積的大小，在色譜中由于體積排除效應(yīng)即滲透能力的差異進(jìn)行分離。高分子在溶液中的體積決定于分子量、高分子鏈的柔順性、支化、溶劑和溫度，當(dāng)高分子鏈的結(jié)構(gòu)、溶劑和溫度確定后，高分子的體積主要依賴于分子量。
凝膠滲透色譜的固定相是多孔性微球，可由交聯(lián)度很高的聚苯乙烯、聚丙烯酸酰胺、葡萄糖和瓊脂糖的凝膠以及多孔硅膠、多孔玻璃等來制備。色譜的淋洗液是聚合物的溶劑。當(dāng)聚合物溶液進(jìn)入色譜后，溶質(zhì)高分子向固定相的微孔中滲透。由于微孔尺寸與高分子的體積相當(dāng)，高分子的滲透幾率取決于高分子的體積，體積越小滲透幾率越大，隨著淋洗液流動(dòng)，它在色譜中走過的路程就越長(zhǎng)，用色譜術(shù)語就是淋洗體積或保留體積增大。反之，高分子體積增大，淋洗體積減小，因而達(dá)到依高分子體積進(jìn)行分離的目的。
圖2是GPC的構(gòu)造示意圖，淋洗液通過輸液泵成為流速恒定的流動(dòng)相，進(jìn)入緊密裝填多孔性微球的色譜柱，中間經(jīng)過一個(gè)可將樣品送往體系的進(jìn)樣裝置。聚合物樣品進(jìn)樣后，淋洗液帶動(dòng)溶液樣品進(jìn)入色譜柱并開始分離，隨著淋洗液的不斷洗提，被分離的高分子組份陸續(xù)從色譜柱中淋出。濃度檢測(cè)器不斷檢測(cè)淋洗液中高分子組份的濃度響應(yīng)，數(shù)據(jù)被記錄最后得到一張完整的GPC/SEC 淋洗曲線。
圖2GPC的構(gòu)造
淋洗曲線表示GPC對(duì)聚合物樣品依高分子體積進(jìn)行分離的結(jié)果，并不是分子
量分布曲線。實(shí)驗(yàn)證明淋洗體積和聚合物分子量有如下關(guān)系：
lnM = A -BVe （1）
式中M為高分子組分的分子量，A、B與高分子鏈結(jié)構(gòu)、支化以及溶劑溫度等影響高分子在溶液中的體積的因素有關(guān)，也與色譜的固定相、體積和操作條件等儀器因素有關(guān)，因此（1）式稱為GPC的標(biāo)定關(guān)系。（1）式的適用性還限制在色譜固定相滲透極限以內(nèi)，也就是說分子量過高或太低都會(huì)使標(biāo)定關(guān)系偏離線性。一般需要用一組已知分子量的窄分布的聚合物標(biāo)準(zhǔn)樣品（標(biāo)樣）對(duì)儀器進(jìn)行標(biāo)定，得到在指定實(shí)驗(yàn)條件，適用于結(jié)構(gòu)和標(biāo)樣相同的聚合物的標(biāo)定關(guān)系。
2.2用凝膠滲透色譜法計(jì)算聚羧酸高效減水劑的分子量。
2.2.1實(shí)驗(yàn)方法。
2.2.1.1所用儀器和試劑。
組合式GPC/SEC 儀（美國(guó)Waters 公司），電子天平，13mm 微孔過濾器；配樣瓶，注射針筒等。
四氫呋喃（AR）（淋洗液）；聚羧酸減水劑（被測(cè)樣品）；窄分子量分布的聚羧酸減水劑（標(biāo)準(zhǔn)樣品）；
2.2.1.2標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)樣品的GPC，求得A、B的值。
選取5個(gè)不同分子量的單分散標(biāo)樣，按分子量順序1、2、3、4、5，分別稱取標(biāo)樣2mg，混在一個(gè)配樣瓶中，用針筒注入約2ml 溶劑，溶解后，用裝有0.45 微米孔徑的微孔濾膜的過濾器過濾。在配樣瓶中稱取約 4mg 被測(cè)樣品，注入約2ml 溶劑，溶解后過濾。
待儀器基線穩(wěn)定后，用進(jìn)樣針筒將混合標(biāo)樣進(jìn)樣，進(jìn)樣量為 100 微升，等待色譜淋洗，最后得到完整的淋洗曲線。作logM- Ve 圖，得GPC/SEC 的標(biāo)定關(guān)系，得A，B值。
2.2.1.3計(jì)算樣品的Mn和Mw。
GPC的數(shù)據(jù)處理，一般采用“切割法”。在譜圖中確定基線后，基線和淋洗曲線所包圍的面積是被分離后的整個(gè)聚合物，以橫坐標(biāo)對(duì)這塊面積等距離切割。切割的含義是把聚合物樣品看成由若干個(gè)具有不同淋洗體積的高分子組份所組成，每個(gè)切割塊的歸一化面積（面積分?jǐn)?shù)）是高分子組份的含量，切割塊的淋洗體積通過標(biāo)定關(guān)系可確定組份的分子量，所有切割塊的歸一化面積和相應(yīng)的分子量列表或作圖，得到完整的聚合物樣品的分子量分布結(jié)果。因?yàn)榍懈钍堑染嚯x的，所以用切割塊的歸一化高度就可以表示組份的含量。切割密度會(huì)影響結(jié)果的精度，當(dāng)然越高越好，但是一般認(rèn)為，一個(gè)聚合物樣品切割成20 塊以上，對(duì)分子量分布描述的誤差已經(jīng)小于GPC/SEC 方法本身的誤差。當(dāng)用計(jì)算機(jī)記錄、處理數(shù)據(jù)時(shí)，可設(shè)定切割成近百塊。用分子量分布數(shù)據(jù)，很容易計(jì)算各種平均分子量。
式（2）、（3）、（4）分別是多分散高分子的數(shù)均分子量，重均分子量和其多分散系數(shù)。
3. 結(jié)論
紅外光譜用于分析聚羧酸高效減水劑的官能團(tuán)種類的作用是巨大而顯著的，凝膠滲透色譜技術(shù)為計(jì)算聚羧酸減水劑的分子量和分子量分布提高了精確的結(jié)果。這兩種現(xiàn)代化微觀分析設(shè)備的使用大大提高了新型聚羧酸減水劑的研發(fā)力度，極大的提高了新型減水劑的研制速度。
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凝膠滲透色譜范文3
【摘要】 目的：建立多花黃精多糖的分子量與分子量分布分析方法。方法：應(yīng)用高效凝膠滲透色譜法，色譜柱為Shodex OHPak SB803HQ（8 mm×300 mm），流動(dòng)相為0.71%硫酸鈉溶液（內(nèi)含0.02%疊氮鈉），柱溫：35 ℃，示差折光檢測(cè)器（檢測(cè)器溫度35 ℃），流速0.5 ml·min-1。結(jié)果：根據(jù)建立的方法測(cè)定，得到多糖的高效凝膠色譜圖，計(jì)算出多花黃精多糖的重均分子量及其分布。結(jié)論：所用方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于多花黃精多糖的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】 高效凝膠色譜法； 多花黃精多糖； 分子量及其分布
多花黃精多糖是從傳統(tǒng)中藥百合科植物多花黃精中發(fā)現(xiàn)并分離出一種低分子量活性多糖，為新藥(中藥)原二類，全國(guó)第一個(gè)治療病毒性角膜炎的中藥。多花黃精多糖抗單純皰疹病毒I型的體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，多花黃精多糖有明顯的抗單純皰疹病毒I型的作用。多糖為單糖的天然聚合物，多糖的性質(zhì)和藥理作用與其分子量大小，分子量分布及其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。多糖的分子量不是均一的，具多分散性，需要用統(tǒng)計(jì)方法表征其平均分子量及其分子量分布。高效凝膠色譜法測(cè)定多糖的分子量及其分布，具有快速，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，在國(guó)內(nèi)外得到了廣泛的應(yīng)用[1]。多花黃精多糖為水溶性多糖，針對(duì)其單糖組成和空間結(jié)構(gòu)與葡聚糖相似，在色譜柱的選擇上傾向于更適合于水溶性多糖分離測(cè)定用的Shodex OHPak SB803HQ系列（對(duì)葡聚糖的排阻極限為1×105）。有關(guān)多花黃精多糖的平均分子量及其分子量分布尚未見相關(guān)報(bào)道，本文應(yīng)用凝膠滲透色譜（GPC）法測(cè)定多花黃精多糖的平均分子量及其分子量分布[2]，為考察生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定一致性及控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，為多花黃精多糖分子大小和藥理作用的相關(guān)性研究打下了一定基礎(chǔ)。
1實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器與試藥
Agilent 1100型高效液相色譜儀（自動(dòng)進(jìn)樣器），示差折光檢測(cè)器。Shodex OHPak SB803HQ凝膠色譜柱。北京龍智達(dá)公司提供GPC專用軟件。
供分子量測(cè)定用右旋糖酐分子量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，D0、D1、D2、D3、D5、D6、D8、D2000分子量依次為180、2500、4600、7100、21400、41100、133800、2000000）；其余試劑均為分析純；高純水用MilliporeQ超純水系統(tǒng)制得。
試驗(yàn)用樣品多花黃精多糖由四川泰華堂制藥有限公司提供。
1.2方法與結(jié)果
1.2.1色譜條件色譜柱為Shodex OHPak SB803HQ，流動(dòng)相為0.71%硫酸鈉溶液（內(nèi)含0.02%疊氮鈉），柱溫：35 ℃，示差折光檢測(cè)器（檢測(cè)器溫度35 ℃），流速0.5 ml·min－1，取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀。
1.2.2溶液的制備取多花黃精多糖適量，加流動(dòng)相制成每1 ml中約含10 mg的溶液，振搖，室溫放置過夜，作為供試品溶液。另取D0，D2000及4～6個(gè)已知分子量的葡聚糖對(duì)照品，同法制成每1ml中各含10 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。
1.2.2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取葡萄糖對(duì)照品溶液（D0），按1.2.1的色譜條件進(jìn)樣，紀(jì)錄色譜圖，按葡萄糖峰計(jì)算理論塔板數(shù)n=5.54×tRW1/2=16083；另取D2000對(duì)照品溶液，1.2.1的色譜條件進(jìn)樣，紀(jì)錄色譜圖，計(jì)算分配系數(shù)，kd=tRt0tTt0=0.52，Kd在0～1之間，符合中國(guó)藥典2005年版的要求。式中tR為供試品峰保留時(shí)間，t0為藍(lán)色葡聚糖（D2000）峰保留時(shí)間，tT為葡萄糖（D0）峰保留時(shí)間。
1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及樣品測(cè)定
取上述右旋糖酐系列對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣，記錄洗脫峰的保留時(shí)間，由GPC專用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)分子量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，以相應(yīng)色譜峰的保留時(shí)間為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。該方法的標(biāo)準(zhǔn)校正曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.9997。根據(jù)GPC專用軟件繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線及供試品的保留時(shí)間采用GPC專用軟件計(jì)算樣品各組分的重均分子量及其分子量分布。 表1 右旋糖酐分子量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品保留時(shí)間及其相應(yīng)的對(duì)數(shù)值
1.2.4 精密度試驗(yàn)取供試品溶液20 μl，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次，根據(jù)GPC曲線計(jì)算重均分子量（Mw）分別為5018，5009，5009，5028，5017，RSD為0.16%，表明該系統(tǒng)測(cè)定樣品分子量的精密度良好。
1.2.5重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為060701的樣品，按“1.2.2”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液5份，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定分子量及其分子量分布，根據(jù)GPC曲線計(jì)算重均分子量（Mw）分別為5020，5028，5044，5054，5053，RSD為0.30%。表明該分析方法測(cè)定樣品分子量精密度良好。
1.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，在0h、2h、4h、8h、12h和24h分別進(jìn)樣，測(cè)定分子量及分子量分布，根據(jù)GPC曲線計(jì)算重均分子量（Mw）分別為5055，5090，5100，5126，5160、5046，RSD為0.84%。表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
1.2.7樣品的測(cè)定取不同批號(hào)的多花黃精多糖樣品，按“1.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，然后按“1.2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定分子量及分子量分布，結(jié)果見表2。表2 3 批樣品重均分子量及其分布情況表
2討論
根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果可見，測(cè)定的三批多花黃精多糖的重均分子量分布在2500～7500之間，分布寬度小于2.0。用本方法測(cè)定多花黃精多糖的分子量與分子量分布，準(zhǔn)確可行，簡(jiǎn)便快捷，精密度好。
分布寬度的引入，使多花黃精多糖的分子量分布更具可控性，能夠通過檢測(cè)該指標(biāo)反映生產(chǎn)該樣品的工藝的變化以及樣品質(zhì)量的變化，使得樣品的質(zhì)量更具有可控性。
參考文獻(xiàn)
凝膠滲透色譜范文4
關(guān)鍵詞：凝膠滲透色譜（GPC）；PL-GPC50；PUMP；雙檢測(cè)器；autosampler
中圖分類號(hào)：TH17
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：1009-2374（2012）23-0080-04
獨(dú)山子石化公司乙烯廠新區(qū)化驗(yàn)室現(xiàn)有英國(guó)PL公司產(chǎn)PL-GPC50常溫凝膠色譜儀5臺(tái)，主要用于18萬噸/年SSBR/SBS橡膠裝置的膠液分子量及其分布分析，另外亦用于13萬噸/年P(guān)S裝置抗沖級(jí)聚苯乙烯（HIPS）及通用級(jí)聚苯乙烯（GPPS）粒料分子量分析。通過凝膠滲透色譜（GPC），能夠給出可靠的工藝調(diào)整參考數(shù)據(jù)，因此PL-GPC50常溫凝膠色譜儀的正常運(yùn)行直接關(guān)系到以上兩套裝置的平穩(wěn)生產(chǎn)。筆者通過安裝、調(diào)試、維修PL-GPC50常溫凝膠色譜儀的工作實(shí)踐，總結(jié)出了一些實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，希望能給此儀器的使用者和維護(hù)者起到一定的指導(dǎo)作用。
1 儀器簡(jiǎn)介及操作和注意事項(xiàng)
1.1 儀器結(jié)構(gòu)
此儀器由溶劑貯器、在線過濾脫氣裝置、Data stream數(shù)模轉(zhuǎn)換器、高壓輸液泵、自動(dòng)進(jìn)樣裝置、色譜柱系統(tǒng)、RI和UV雙檢測(cè)器、自動(dòng)記錄及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)幾大部分構(gòu)成。
圖1 原則流程圖
1.2 基本操作及注意事項(xiàng)
1.2.1 溶劑準(zhǔn)備。將過濾、超聲脫氣后的新鮮THF溶劑加入試劑瓶，同時(shí)在每4升溶劑瓶中加入1克的抗氧劑（常用的抗氧化劑為BHT），以防THF在使用過程中氧化。
1.2.2 儀器開機(jī)。開機(jī)前檢查泵頭處的“Purge”閥的旋鈕是否處于正常流路（旋緊為正常流路），并檢查自動(dòng)進(jìn)樣器的各條連線是否理順；打開主機(jī)和Data stream后面板的電源開關(guān)，儀器各部分進(jìn)行自檢，等待完成后打開計(jì)算機(jī)運(yùn)行 PL Instrument Control軟件，進(jìn)行儀器和計(jì)算機(jī)之間的通訊，使GPC50進(jìn)入計(jì)算機(jī)軟件控制狀態(tài)。此時(shí)溶劑輸送泵處于停止?fàn)顟B(tài)，狀態(tài)顯示為紅色的叉號(hào)，其余為綠色的圓圈。
1.2.3 泵條件化和排氣。若機(jī)器初次使用或長(zhǎng)期停用或更換溶劑時(shí)需做排氣操作，點(diǎn)擊軟件界面左側(cè)PUMP處，可在右側(cè)見泵操作界面，設(shè)定流速為工作流速（常規(guī)流速為1mL/min），設(shè)定工作壓力范圍0～20MPa（Min Pressure和Max Pressure）和流速改變梯度（Flow Ramp），點(diǎn)擊Update，參數(shù)即發(fā)送至儀器并開始執(zhí)行。泵的流量允許范圍為0～10mL/min，正常工作和進(jìn)樣時(shí)的流速必須為1mL/min，閑置時(shí)的流速可以是0.1mL/min，只有當(dāng)“Purge”旋鈕松開時(shí)才能使用大于1mL/min的流速；流速的改變不能太快，必須逐步地升高或降低，如從1mL/min降到閑置時(shí)的0.1mL/min時(shí)應(yīng)按照每次0.2mL/min的頻率逐步降低；當(dāng)泵壓力異常時(shí)應(yīng)及時(shí)檢查“Purge”閥的狀態(tài)且用濾紙對(duì)柱接頭處檢漏。排氣操作時(shí)，可打開“Purge”閥，觀察氣泡從溶劑廢液管中的流出情況（此時(shí)泵壓力為零）。在確認(rèn)泵流出溶劑已無氣泡的條件下，并閉泵“Purge”閥。
1.2.4 柱溫箱條件化。點(diǎn)擊軟件界面左側(cè)oven處，在右側(cè)界面設(shè)定柱箱溫度（oven temperature），并點(diǎn)擊Update發(fā)送至儀器。在儀器到達(dá)設(shè)定參數(shù)前，oven處綠色圓圈處于閃動(dòng)狀態(tài)；當(dāng)儀器達(dá)到設(shè)定參數(shù)并穩(wěn)定后，則綠色圓圈會(huì)穩(wěn)定點(diǎn)亮。柱箱的溫度在分析過程中必須恒溫40℃。
1.2.5 RI和UV檢測(cè)器條件化。在儀器升溫和平衡過程中，可以隨時(shí)對(duì)RI和UV檢測(cè)器操作。如檢測(cè)器基線不穩(wěn)，可點(diǎn)擊左側(cè)Purge處顯示操作界面對(duì)檢測(cè)器進(jìn)行操作。點(diǎn)擊Start Purge可對(duì)參比池進(jìn)行沖洗；點(diǎn)擊Auto Zero進(jìn)行自動(dòng)調(diào)零。（RI參比池Purge后應(yīng)該給予充分的穩(wěn)定時(shí)間，通常2小時(shí)以上，基線平穩(wěn)后方可，基線可通過Data stream monitor查看）。允許通過RI檢測(cè)器池體的最大允許流量為5mL/min，因此即使“Purge”閥處于打開態(tài)時(shí)，沖洗RI檢測(cè)器參比池的流速亦不應(yīng)超過5mL/min，因?yàn)镽I檢測(cè)器的池體僅8微升，所以每次大流量沖洗時(shí)間均無需太長(zhǎng)，一般設(shè)定60秒即可。進(jìn)樣前最好將UV和RI檢測(cè)器全部調(diào)零。
1.2.6 樣品制備。根據(jù)MMPP1方法要求將大約50mL的聚合溶液加入大約200mL乙醇中，在一個(gè)500mL的玻璃燒杯內(nèi)攪拌，用力擠壓凝聚物使部分干燥，然后在烘箱中烘干凝結(jié)物，直到完全脫除溶劑。在一個(gè)50mL容量瓶?jī)?nèi)，稱出0.075±0.001g的聚合物，加入約30mL含內(nèi)標(biāo)溶液的THF溶解直至樣品完全溶解。將樣品經(jīng)0.45mm的PTFE過濾器過濾后準(zhǔn)備進(jìn)樣分析（過濾步驟絕不可省略，否則形成的凝膠會(huì)造成系統(tǒng)堵塞）。
1.2.7 數(shù)據(jù)分析。
（1）創(chuàng)建工作簿：運(yùn)行GPC Online，選擇
Create a New Workbook。以后可多次調(diào)用此Workbook。鍵入文件名并選擇保存路徑，同時(shí)可在Experiment Tile和Comment中作注釋。完成后點(diǎn)擊確定。在Conditions界面下，可填寫所用溶劑、溶劑RI值、流速、溫度、色譜柱信息以及檢測(cè)器信息。Data Collection界面下，可設(shè)定自動(dòng)進(jìn)樣器、定量環(huán)、進(jìn)樣方式、數(shù)據(jù)采集時(shí)間及采樣速率，在Instruments下可添加設(shè)備信息。
凝膠滲透色譜范文5
【摘要】 目的評(píng)價(jià)消痛貼膏中潤(rùn)濕劑的透皮促透作用。方法選擇消痛貼膏中主藥獨(dú)一味所含木犀草素為模型藥物，采用離體擴(kuò)散池法，以高效液相色譜測(cè)定接受液中木犀草素的含量。含量測(cè)定采用Platisil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，迪馬公司)；乙腈∶0.1％磷酸（35∶65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm；流速1.0 ml·min-1。結(jié)果木犀草素進(jìn)樣量在0.040 88～2.044 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r＝0.999 8。與對(duì)照組滲透系數(shù)0.373 2相比，加潤(rùn)濕劑組滲透系數(shù)3.97，滲透系數(shù)增加10.63倍。結(jié)論該潤(rùn)濕劑能增加消痛貼膏中木犀草素的滲透速率和累積透過量。
【關(guān)鍵詞】 消痛貼 潤(rùn)濕劑 促透 木犀草素
中藥等傳統(tǒng)醫(yī)藥中的外用制劑中的有效成分一部分在體表起消除皮膚炎癥、殺菌等作用外，另一部分可以透過皮膚角質(zhì)層進(jìn)入皮下及肌肉組織局部，吸收進(jìn)入體循環(huán)，產(chǎn)生全身或局部治療。傳統(tǒng)的中藥透皮給藥制劑有散劑、軟膏劑、硬膏劑等。近年來，隨著制藥技術(shù)的進(jìn)步和藥用高分子藥用材料的應(yīng)用，諸如涂膜劑、巴布劑、凝膠劑等新劑型也多有應(yīng)用。為了促進(jìn)處方中有效成分的透皮吸收，通常會(huì)在制劑中加入一定的透皮吸收促進(jìn)劑。透皮吸收促進(jìn)劑的加入量、加入方式以及和基質(zhì)的相容性成分為中藥透皮給藥制劑的處方設(shè)計(jì)和制備工藝的難點(diǎn)。經(jīng)過檢索，在我國(guó)批準(zhǔn)上市中藥品種中，消痛貼膏（國(guó)藥準(zhǔn)字：Z54020113）中促透劑的加入方法很有特點(diǎn)：將促透劑（潤(rùn)濕劑）與主藥分開，使用時(shí)將藥貼的塑料薄膜揭除，將小袋內(nèi)的潤(rùn)濕劑均勻涂在中間藥墊表面，敷于患處或穴位。本研究采用擴(kuò)散池評(píng)價(jià)消痛貼膏中潤(rùn)濕劑的促透作用。
1 儀器與材料
HP8453E紫外可見光譜儀（Aglient公司）； Aglient 1100型高效液相色譜儀（Aglient公司）；Platisil C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱；RYJ－6A型藥物透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。消痛貼膏（奇正藏藥有限公司，批號(hào)070632）。木犀草素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111520-200504）。木犀草素單體（南京青澤醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，批號(hào)QZM07110， HPLC檢測(cè)含量大于90%）。甲醇為色譜純（Merck公司）；其他試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；雙蒸水，自制。昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g（普通級(jí)，許可證號(hào)SCXK 2003-0003，上海斯萊克動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房二樓）。
2 方法與結(jié)果
2.1 木犀草素體外透皮實(shí)驗(yàn)分析方法的建立
2.1.1 HPLC測(cè)定色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇： 參照《中國(guó)藥典》［1］獨(dú)一味含量測(cè)定項(xiàng)下方法，吸收波長(zhǎng)選擇為350 nm。
色譜條件：色譜柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Platisil C18， 5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相，乙腈∶0.1％磷酸（35∶65）；檢測(cè)波長(zhǎng)350 nm；流速1.0 ml·min-1；柱溫30℃。理論塔板數(shù)按木犀草素計(jì)算應(yīng)不低于3 000，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。結(jié)果見圖1～2。
圖1 木犀草素對(duì)照品HPLC圖（略）
圖2 樣品HPLC圖（略）
2.1.2 木犀草素HPLC測(cè)定方法學(xué)考察供試品溶液的制備：將消痛貼膏藥粉用10倍20%的乙醇提取3次，60 min/次，收集提取液，回收乙醇至干，得提取物。取消痛貼膏藥粉提取物35 mg，加入10 mg木犀草素單體，實(shí)驗(yàn)組溶于2 ml的奇正潤(rùn)濕劑，稀釋組溶于2 ml潤(rùn)濕劑稀釋液（潤(rùn)濕劑∶水＝1∶1）中，對(duì)照組溶于2 ml 的蒸餾水中，超聲30 min。
接受液比例：聚乙二醇400∶生理鹽水 = 20∶ 80
木犀草素線性關(guān)系考察［2，3］：精密稱取木犀草素對(duì)照品10.22 mg置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含木犀草素102.2 μg的對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密吸取該液0.2，0.5，1，2，4，5，10 ml置10 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含木犀草素2.044，5.11，10.22，20.44，40.88，51.1，102.2 μg的系列對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述系列對(duì)照品溶液各20 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，記錄色譜圖，測(cè)定結(jié)果見表1，并以對(duì)照品濃度X（μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積值Y值（mAU）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程：Y=86.275X，r=0.999 8。結(jié)果表明，木犀草素在0.040 88 ～2.044 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
轉(zhuǎn)貼于
表1 木犀草素線性關(guān)系考察（略）
精密度實(shí)驗(yàn)［4］：①日內(nèi)精密度
配置低、中、高3個(gè)濃度的木犀草素對(duì)照品溶液，1 d內(nèi)注入液相色譜儀測(cè)定3次，測(cè)定木犀草素峰面積積分值，求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表2。②日間精密度：以上低、中、高3個(gè)濃度的木犀草素對(duì)照品溶液，測(cè)定1次/d，共測(cè)定5次。結(jié)果見表3。
表2 木犀草素日內(nèi)精密度（略）
表3 木犀草素日間精密度（略）
穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：精密吸取濃度為5.11 μg/ml的對(duì)照品溶液20 μl，按上述色譜條件，分別于0，1，2，4，6，8，12，24 h進(jìn)樣，峰面積平均值為 438.9，RSD=1.15%。
回收率實(shí)驗(yàn)：精密吸取濃度為0.2 mg/ml的木犀草素對(duì)照品溶液5，1，0.5 ml，分別置于10 ml容量瓶中，用空白的透皮接受液（比例為PEG400∶NS＝1∶5）定容至刻度，配制成高中低3個(gè)不同濃度的溶液。取20 μl進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，進(jìn)行方法回收率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表4。
表4 木犀草素回收率實(shí)驗(yàn)（略）
2.2 潤(rùn)濕劑的透皮促透作用研究
2.2.1 皮膚的選擇和處理取雄性小鼠，斷頸處死，即刻用電動(dòng)剃毛刀剔出腹部鼠毛，取下皮膚，將取下的皮膚平鋪于干凈的玻璃板上，角質(zhì)層朝下，用鑷子剔除皮下的脂肪組織及黏連物后，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，密封冷凍于-10℃冰箱中保存，于1周內(nèi)使用，每次實(shí)驗(yàn)前目視檢查鼠皮的完整性，如有破損則不得使用。
2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組加潤(rùn)濕劑組、加潤(rùn)濕劑1∶1稀釋組、對(duì)照組（不加潤(rùn)濕劑）。
2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法向體外透皮吸收儀中加入適量水，開啟電源和恒溫槽磁力攪拌，設(shè)定溫度為（37±0.5）℃，將新鮮離體去毛小鼠的皮膚固定于改良Franz擴(kuò)散池進(jìn)行體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)，真皮面向接受液。將供給藥物放入供給池中，向接受池內(nèi)注入5 ml接受液，放入透皮吸收儀中，設(shè)定接受池?cái)嚢杷俣葹?00 r/min。15 min后開始計(jì)時(shí)，記為0 min，分別于1，2，3，4，6，8 h取樣，每次取樣的同時(shí)需向接受池中補(bǔ)充等量的接受液，樣品通過0.45 μm 微孔過濾膜，測(cè)定。結(jié)果見表5。
表5 透皮吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
3 小結(jié)
透皮吸收促進(jìn)劑的加入方式以及與基質(zhì)的相容性是中藥透皮給藥制劑的處方設(shè)計(jì)和制備工藝的難點(diǎn)。將促透劑（潤(rùn)濕劑）與主藥分開，使用時(shí)潤(rùn)濕劑加入的給藥方式回避了透皮給藥制劑處方設(shè)計(jì)和制備工藝的難點(diǎn)，同時(shí)，類似于利福平滴眼液，這種給藥方式也避免了一些天然活性成分在溶液中穩(wěn)定性差的不足。
本研究是為了評(píng)價(jià)潤(rùn)濕劑的促透作用，但由于消痛貼膏中的可測(cè)成分木犀草素含量較低（僅為0.084 %），研究中在消痛貼主藥提取物中加入木犀草素單體作為模型藥物，這樣增加了透皮吸收的成分檢測(cè)的可行性；同時(shí)，較單獨(dú)用化學(xué)單體為模型藥物，更好模擬了制劑中其他成分存在的情況下的透皮吸收行為。
研究表明消痛貼膏的潤(rùn)濕劑中含有樟腦、冰片等成分，正是由于這些成分的存在，使?jié)櫇駝┚哂辛似つw促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與對(duì)照組滲透系數(shù)0.373 2相比，加潤(rùn)濕劑組滲透系數(shù)3.968 1，滲透系數(shù)增加10.63倍，說明潤(rùn)濕劑能增加消痛貼膏中木犀草素的滲透速率和累積透過量。同時(shí)實(shí)驗(yàn)中將潤(rùn)濕劑稀釋1倍，結(jié)果稀釋組比對(duì)照組滲透系數(shù)增加4.18倍，說明潤(rùn)濕劑的促透作用與樟腦、冰片等起促透作用的成分有一定的量-效關(guān)系。
研究中還以消痛貼膏主藥等劑量制備成凝膠劑，同法測(cè)定，結(jié)果在接受液中很難檢測(cè)到木犀草素。實(shí)驗(yàn)中還考察過氮酮及潤(rùn)濕劑在凝膠劑中的促透作用，僅加氮酮組6 h后能檢測(cè)到目標(biāo)峰，但峰面積很小，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)下限附近。說明木犀草素可能被凝膠劑中的大分子基質(zhì)包裹，不宜釋放。提示外用透皮吸收制劑在進(jìn)行劑型改革時(shí)，需要進(jìn)行皮膚滲透實(shí)驗(yàn)的比較研究。對(duì)于需要透皮吸收的成分，凝膠劑可能不完全適用。
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凝膠滲透色譜范文6
關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留；檢測(cè)；前處理技術(shù)
近年來，由于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中忽視農(nóng)藥的正確、合理使用，農(nóng)藥污染問題經(jīng)常發(fā)生，農(nóng)藥殘留量超標(biāo)現(xiàn)象相當(dāng)嚴(yán)重，并呈現(xiàn)逐年加劇的趨勢(shì)。為保障人民的身體健康、有效控制農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中的使用和對(duì)其殘留量進(jìn)行監(jiān)控，大力開展農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)特別是相關(guān)的前處理技術(shù)的研究是非常必要的。農(nóng)藥殘留測(cè)定之前要有適合于各種樣品的理化性質(zhì)的萃取、凈化、濃縮等前處理步驟，這些前處理過程往往對(duì)農(nóng)藥殘留分析的準(zhǔn)確性、精確程度有重要影響。由于農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)涉及的樣品種類繁多、樣品組成及其濃度復(fù)雜多變、樣品物理形態(tài)范圍廣泛，對(duì)農(nóng)藥殘留測(cè)定構(gòu)成的干擾因素特別多，所以需要選擇科學(xué)有效的處理方法。據(jù)統(tǒng)計(jì)表明[1]，大部分農(nóng)藥殘留檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)樣品前處理過程的時(shí)間約占整個(gè)分析時(shí)間的2/3。為了提高分析測(cè)定效率，改善和優(yōu)化農(nóng)藥殘留檢測(cè)樣品制備的方法和技術(shù)是一個(gè)重要問題。在現(xiàn)代農(nóng)藥殘留分析中，有些提取方法已經(jīng)能夠達(dá)到部分凈化或完全凈化的效果。因此，提取和凈化方法的界限已十分模糊。這些新技術(shù)的共同特點(diǎn)是節(jié)省時(shí)間，減輕勞動(dòng)強(qiáng)度，節(jié)省溶劑，減少樣品用量，提高提取或凈化效率以及自動(dòng)化水平。目前，得到廣泛應(yīng)用的新技術(shù)主要有超臨界流體提取、固相微萃取、微波輔助萃取技術(shù)、膠滲透色譜、基質(zhì)固相分散萃取、固相萃取等。
1超臨界流體萃取（supercritical fluid extraction，sfe）
超臨界流體（supercritical fluid，scf）是指處于臨界溫度和臨界壓力的非凝縮性的高密度流體。這種流體介于氣體和液體之間，兼具二者的優(yōu)點(diǎn)。超臨界流體萃取（sfe）是指利用處于超臨界狀態(tài)的流體為溶劑對(duì)樣品中待測(cè)組分的萃取方法。lehotay等[2]首次報(bào)道了應(yīng)用sfe技術(shù)檢測(cè)蔬菜中五氯硝基苯殘留，樣品無需進(jìn)一步凈化即可通過氣質(zhì)聯(lián)機(jī)（gc-ms）檢測(cè)。隨后lehotay等再次使用sfe，gc-ms檢測(cè)了蔬菜、水果中46種農(nóng)藥殘留，除甲胺磷和乙酰甲胺磷外，其他農(nóng)藥的回收率都在80%以上。為提高sfe的萃取效果，常在超臨界流體co2中加入少量的極性溶劑。rhan通過在洋蔥、胡蘿卜前處理過程中加入甲醇，有效地提高了被檢農(nóng)藥的回收率。劉瑜等[3]應(yīng)用此技術(shù)對(duì)蘋果中5種氨基甲酸酯農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果支持了這一觀點(diǎn)。sfe技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是可進(jìn)行選擇性萃取，萃取物不會(huì)改變其原來的性質(zhì)，萃取過程簡(jiǎn)單易于調(diào)節(jié)；缺點(diǎn)是萃取裝置較昂貴，不適于分析水樣和極性較強(qiáng)的物質(zhì)[4]。
2固相微萃取（solid- phase microextraction，spme）
固相微萃取是 20世紀(jì)80年代末由加拿大waterloo大學(xué)pawliszyn和arhturhe教授提出的，它是在固相萃取技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種兼樣品制備的前處理技術(shù)。spme的原理是利用待測(cè)物在基體和萃取相之間的非均相平衡，使待測(cè)組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的固定相涂層，待吸附平衡后，再以氣相色譜或高效液相色譜分離和測(cè)定待測(cè)組分。spme技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快捷、無需萃取溶劑的特點(diǎn)，非常適用于揮發(fā)或半揮發(fā)農(nóng)藥殘留分析。影響固相微萃取結(jié)果的因素包括萃取頭類型、萃取時(shí)間、離子強(qiáng)度、解吸附溫度和解吸附時(shí)間等。陳偉琪等[5]利用100 μm聚二甲基硅氧烷萃取頭浸入勻漿液的萃取方式，由gc-fpd測(cè)定了茼蒿中的甲拌磷等 4種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量，討論了攪拌速度、離子強(qiáng)度、平衡時(shí)間等影響因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響；lambropoulou等采用100 μm聚二甲基硅氧烷萃取頭、頂空-固相微萃取（hs-spme）方式，用gc-ms方法測(cè)定了草莓和櫻桃中的乙硫磷、對(duì)硫磷、倍硫磷等 7種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量；sakamoto等發(fā)展了一種采用85 μm聚丙烯酸酯萃取頭、頂空-固相微萃取測(cè)定水中的158種農(nóng)藥殘留量的gc-ms方法，探討了不同種類萃取頭、鹽濃度、ph值和萃取溫度等參數(shù)的影響。固相微萃取的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單快速，價(jià)廉實(shí)用，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)；缺點(diǎn)是因固定相吸附容量有限，定量結(jié)果誤差相對(duì)較大，主要用于定量測(cè)定。
3微波輔助萃取技術(shù)（microwave aided extraction，mae）
微波輔助萃取是1986年匈牙利學(xué)者ganzler等人通過利用微波能萃取土壤、食品、飼料等固體物中的有機(jī)物，提出一種新的少溶劑樣品前處理方法
。微波輔助萃取技術(shù)是對(duì)樣品進(jìn)行微波加熱，利用極性分子可迅速吸收微波能量的特性來加熱一些具有極性的溶劑，達(dá)到萃取樣品中含目標(biāo)化合物，分離雜質(zhì)的目的。akhtar等[6]先用mae法從精飼料中萃取出鹽霉素，而后用hplc法測(cè)定其濃度。hummert等[7]用mae法萃取后用gc-ecd測(cè)定了海洋哺乳動(dòng)物脂肪組織中的有機(jī)氯化合物，經(jīng)該方法與索氏提取方法萃取的樣品中類酯的含量相似。微波輔助萃取技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是快速節(jié)能、節(jié)省溶劑、污染小；缺點(diǎn)是不易自動(dòng)化，且一般僅用于有機(jī)氯類農(nóng)藥的提取。
4凝膠滲透色譜（gel permeation chromatography，gpc）
凝膠滲透色譜技術(shù)是根據(jù)溶質(zhì)（被分離物質(zhì)）分子量的不同，通過具有分子篩性質(zhì)的固定相（凝膠），使物質(zhì)達(dá)到分離。凝膠滲透色譜法最初主要用來分離蛋白質(zhì)，但隨著適用于非水溶劑分離的凝膠類型的增加，凝膠滲透技術(shù)應(yīng)用于農(nóng)藥殘留量?jī)艋靡园l(fā)展。balinova采用gpc提純步驟，用hplc檢測(cè)了5種gc無法檢測(cè)的農(nóng)藥（殺蟲隆、氟蟲脲、四螨嗪、噻螨酮、除蟲脲），方法靈敏度高，準(zhǔn)確度及精密度好，數(shù)據(jù)線性范圍寬（2~40 ng），能夠很好地分離共萃取基質(zhì)。該方法的操作難度相對(duì)較高，初學(xué)者不易掌握。
5基質(zhì)固相分散萃取（matrixsolid-phase dispersion extr-action，mspd）
基質(zhì)固相分散萃取由barker于1989年首次提出。這項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是不需要進(jìn)行組織勻漿、沉淀、離心、ph調(diào)節(jié)和樣品轉(zhuǎn)移等操作。mspd的原理是將c18等固相萃取吸附劑與固體、半固體或黏性的樣品一起研磨，得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料裝柱，然后用不同的溶液淋洗柱子，將各種待測(cè)物洗脫下來。mspd多應(yīng)用于從動(dòng)物組織、蔬菜、水果中分離藥品、除草劑、殺蟲劑和其他污染物，barber s a和王運(yùn)浩等認(rèn)為影響mspd效果的因素包括吸附劑的粒徑、鍵合相的性質(zhì)、樣品基質(zhì)的性質(zhì)以及基質(zhì)的修飾、淋洗劑的性質(zhì)以及加入的順序等。kristenson等發(fā)展了一種簡(jiǎn)便快速的mspd/gc-ms方法測(cè)定水果中的氯菊酯和倍硫磷、馬拉硫磷等10種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量。選擇c8作為吸附劑，每次分析僅需25 mg樣品和100 μl溶劑；pico等利用c18做分散吸附劑、硅膠柱凈化、gc-npd和gc-ecd測(cè)定的方法檢測(cè)了水果和蔬菜中的克菌丹、滅菌丹等8種殺菌劑；morzycka建立了一種簡(jiǎn)便的多殘留分析的mspd/gc-npd方法測(cè)定蜂蜜中的乙硫磷、毒死蜱等12種農(nóng)藥的殘留量，采用florisil和硅膠作分散吸附劑，氧化鋁和硅膠作為凈化吸附劑，達(dá)到了較好的凈化效果和良好的回收率。該方法僅適用于一類化合物的分離。
6固相萃取（solid phase extraction，spe）
固相萃取（spe）是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。與液/液萃取相比，固相萃取有很多優(yōu)點(diǎn)：固相萃取不需要大量互不相溶的溶劑，處理過程中不會(huì)產(chǎn)生乳化現(xiàn)象；采用高效、高選擇性的吸附劑（固定相），能顯著減少溶劑的用量，簡(jiǎn)化樣品的預(yù)處理過程，同時(shí)所需費(fèi)用也有所減少。一般來說，固相萃取所需時(shí)間為液/液萃取的1/2，而費(fèi)用為液/液萃取的1/5。固相萃取實(shí)質(zhì)上是一種液相色譜分離，其主要分離模式也與液相色譜相同，可分為正相（吸附劑極性大于洗脫液極性）、反相（吸附劑極性小于洗脫液極性），離子交換和吸附。目前，用于hplc的填料幾乎均可用于spe。但spe柱的填料粒徑大于hplc填料，spe柱效會(huì)遠(yuǎn)低于hplc色譜柱。因此，該方法適于分離保留性質(zhì)差別很大的化合物，主要用于處理樣品。
固相萃取主要用于復(fù)雜樣品中微量或痕量目標(biāo)化合物的分離和富集。例如生物體（如血液、尿等）中藥物及其代謝產(chǎn)物的分析、食品中有效成分或有害成分的分析、環(huán)保水樣中各種污染物（可揮發(fā)性有機(jī)物和半揮發(fā)性有機(jī)物）的分析等，都可以使用固相萃取將目標(biāo)化合物分離出來，并加以富集。
該文將近年來發(fā)展迅速的固相萃取前處理技術(shù)與先進(jìn)的氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)技術(shù)結(jié)合起來，期望能探索出一種快速方便、準(zhǔn)確可靠、用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的農(nóng)藥殘留（包括有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯、除草劑、殺菌劑）檢測(cè)前處理方法，進(jìn)一步完善農(nóng)藥殘留檢測(cè)方案，為制訂覆蓋面廣、快速、有效的新標(biāo)準(zhǔn)方法提供技術(shù)支持。
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