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低密度脂蛋白范文1
如今,測(cè)定LDL-C已是醫(yī)院檢驗(yàn)中的常規(guī)項(xiàng)目,測(cè)定結(jié)果也比過去準(zhǔn)確得多。那么,我們血中的LDL-C含量有多少才好呢?在1997年,我國(guó)有關(guān)專家聯(lián)合制定了《血脂異常防治建議》,將LDL-C的含量低于3.12毫摩爾/升(120毫克/分升)定為合適范圍;3.15～3.61毫摩爾/升(121～139毫克/分升)為邊緣升高;3.64 毫摩爾/升(140毫克/分升)以上為升高。2002年,我國(guó)進(jìn)行的大規(guī)模血脂水平調(diào)查發(fā)現(xiàn),隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人民生活水平的提高和人們生活方式的改變,人群中的LDL-C含量逐步升高。而且,城市居民高于農(nóng)村,大城市高于中小城市,富裕農(nóng)村高于貧困農(nóng)村。根據(jù)這一情況,2007年中華醫(yī)學(xué)會(huì)多個(gè)有關(guān)學(xué)會(huì)聯(lián)合研討,結(jié)果了《中國(guó)成人血脂異常防治指南》。指南中將血LDL-C調(diào)整為低于3.37毫摩爾/升(130毫克/分升)定為合適范圍;3.37～4.12毫摩爾/升(130～159 毫克/分升)為邊緣升高;4.14毫摩爾/升(160毫克/分升)以上為升高。可見新的指南將三個(gè)水平的判定標(biāo)準(zhǔn)都提高了。這是因?yàn)槿巳褐械腖DL-C水平均有升高。我們應(yīng)該以這一新標(biāo)準(zhǔn)作為臨床判斷。
根據(jù)血LDL-C水平和其他危險(xiǎn)因素,包括年齡(男≥45,女≥55歲)、吸煙、高密度脂蛋白減低、肥胖和缺血性心血管病的家族史,可進(jìn)一步判斷患者發(fā)生心腦血管病的危險(xiǎn)程度。指南中將危險(xiǎn)程度分為低危險(xiǎn)性(低危)、中危險(xiǎn)性(中危)和高危險(xiǎn)性(高危)三類。判斷時(shí),如LDL-C在邊緣升高范圍,則
1. 無高血壓且其他危險(xiǎn)因素不足3個(gè)者為低危。
2. 無高血壓且其他危險(xiǎn)因素有3個(gè)或更多者為低危。
3. 有高血壓且其他危險(xiǎn)因素1個(gè)或更多者為中危。
4. 有冠心病及相等的疾病者為高危。
如LDL-C在升高范圍,則:
1.無高血壓且其他危險(xiǎn)因素不足3個(gè)者為低危。
2.無高血壓且其他危險(xiǎn)因素有3個(gè)或更多者為中危。
3.有高血壓且其他危險(xiǎn)因素1個(gè)或更多者為高危。
低密度脂蛋白范文2
血脂代謝異常是造成動(dòng)脈粥樣硬化和脂肪肝等多種疾病的重要危險(xiǎn)因素。據(jù)《中國(guó)18歲及以上人群血脂異常流行特點(diǎn)研究》報(bào)告，中國(guó)人群血脂水平和血脂異常患病率雖然低于多數(shù)西方國(guó)家，但仍然是威脅我國(guó)人民健康的重要危險(xiǎn)因素1，需引起人民群眾的重視。同時(shí)研究亦表明，血脂中的低密度脂蛋白（LDL-C）升高是冠心病和缺血性腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一，因此對(duì)于健康人群和患有心血管疾病人群的LDL-C值達(dá)標(biāo)管理不能一概而論，需要根據(jù)不同臨床情況來進(jìn)行目標(biāo)值的管理。為此，對(duì)前來就診的352例本社區(qū)人群的LDL-C值情況進(jìn)行分析研究，結(jié)果如下。
資料與方法
2012年5～8月廣州市越秀區(qū)光塔街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心住院或門診就診有進(jìn)行LDL-C檢測(cè)的社區(qū)居民352例，男94例，女258例，年齡35～77歲，平均56歲。并根據(jù)患者臨床情況按表1進(jìn)行分組，其中A組47例（13.35%）；B組47例（13.35%）；C組108例（30.68%）；D組150組（42.61%）。
分組標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)歐洲心臟病學(xué)會(huì)（ESC）、歐洲動(dòng)脈粥樣硬化學(xué)會(huì)（EAS）于2011年聯(lián)合首個(gè)《歐洲血脂異常管理指南》中按不同臨床情況進(jìn)行危險(xiǎn)分層作為分組標(biāo)準(zhǔn)2，見表1。
方法：全部社區(qū)居民均為空腹抽取靜脈血，采用選擇性抑制法檢測(cè)，該試劑LDL-C的參考值范圍1.4～3.5mmol/L。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用X2檢驗(yàn)。
結(jié)果
分析每組各人的LDL-C值，與檢測(cè)試劑的參考值范圍比較，高于參考值范圍的即為按參考值范圍標(biāo)準(zhǔn)不達(dá)標(biāo)；同時(shí)也與表1中每組的LDL-C目標(biāo)值比較，高于其目標(biāo)值即為按危險(xiǎn)分層標(biāo)準(zhǔn)不達(dá)標(biāo)，見表2。
討論
血脂通常包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）。而LDL-C是血漿中含量最多的一種載脂蛋白，其膽固醇的含量在一半以上，血漿中膽固醇約65%是在其內(nèi)。許多實(shí)驗(yàn)都證實(shí)LDL-C與心血管疾病的發(fā)生有密切關(guān)系，隨其濃度的增加，而成遞增關(guān)系。事實(shí)上，早在2008年《美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)和美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)在對(duì)高危人群的血脂管理共識(shí)》（ACC/ADA）中，即提出LDL-C“低一點(diǎn)，好一些”的觀點(diǎn)，特別是在已經(jīng)明確心血管疾病（CVD）患者中。共識(shí)指出，理論上，所有人都應(yīng)該將LDL-C維持在1.3mmol/L（50mg/dl）的“新生兒”水平，以預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化，CVD患者也應(yīng)該控制在類似低的水平3。由此，可以明確，LDL-C控制目標(biāo)日趨嚴(yán)格，尤其對(duì)我國(guó)CVD患者，只有嚴(yán)格控制LDL-C水平，才能有效降低發(fā)病率及死亡率，改善臨床結(jié)局。
目前，我國(guó)不少醫(yī)院在治療CVD患者LDL-C的方面，治療目標(biāo)通常定在了參考值的高值，即低于參考值高值就為控制達(dá)標(biāo)，高于參考值高值就為控制不達(dá)標(biāo)。此法有利于全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一及醫(yī)患雙方的掌握及認(rèn)識(shí)。但是，對(duì)于不同臨床情況的患者（即已經(jīng)出現(xiàn)心、腦、腎等臟器損害及糖尿病、高血壓的患者），選擇了同一的降LDL-C治療目標(biāo)，顯然是不足的，會(huì)導(dǎo)致患者啟動(dòng)調(diào)脂治療的標(biāo)準(zhǔn)被抬高和極高危、高危患者得不到強(qiáng)化降脂治療。
為此，中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)組織開展的中國(guó)膽固醇教育計(jì)劃建議：在血脂化驗(yàn)單上增加指南危險(xiǎn)分層信息，切實(shí)提高臨床醫(yī)生和患者了解不同人群不同臨床情況的膽固醇的控制目標(biāo)，對(duì)屬于不同危險(xiǎn)層級(jí)的患者進(jìn)行個(gè)性化治療，提高血脂治療的達(dá)標(biāo)率，從而更有效地降低心腦血管事件的發(fā)生4。歐洲心臟病學(xué)會(huì)（ESC）、歐洲動(dòng)脈粥樣硬化學(xué)會(huì)（EAS）日前聯(lián)合首個(gè)《歐洲血脂異常管理指南》更是進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了降低LDL-C的重要性，并且設(shè)定了更為嚴(yán)格的目標(biāo)值5。
從本研究可以看出，采用參考值范圍標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析，有37.22%的人超過標(biāo)準(zhǔn)，可診斷為高低密度脂蛋白血癥。而采用危險(xiǎn)分層標(biāo)準(zhǔn)后重新定義高低密度脂蛋白血癥，有44.89%的人可診斷為高低密度脂蛋白血癥，明顯高于參考范圍標(biāo)準(zhǔn)下的高低密度脂蛋白血癥人數(shù)。提示存在7.66%的人群被漏診或被認(rèn)為低密度脂蛋白水平降至正常了，可能導(dǎo)致這部分的人群未能進(jìn)行及時(shí)降脂治療或不再進(jìn)行持續(xù)的血脂干預(yù)治療。
而存在臨床情況的人群（即屬于危險(xiǎn)分級(jí)A、B、C組的人群）中，如果采用參考值范圍標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析，則有38.12%的人（77/202）被認(rèn)為血脂升高或血脂不達(dá)標(biāo)；采用危險(xiǎn)分層標(biāo)準(zhǔn)后，則有63.36%（128/202）的人被認(rèn)為血脂高或控制不達(dá)標(biāo)，較參考值標(biāo)準(zhǔn)高出25.24%。此類人群如果不繼續(xù)進(jìn)行調(diào)脂治療，低密度脂蛋白血再次升高或再次發(fā)生心腦血管事件的危險(xiǎn)性大大增加。
對(duì)于無臨床情況（即屬于危險(xiǎn)分級(jí)D組的人群），被參考值范圍標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為高低密度脂蛋白血癥36%，而被危險(xiǎn)分層標(biāo)準(zhǔn)劃分為高低密度脂蛋白血癥的占20%，較參考值范圍標(biāo)準(zhǔn)的低16%，而這16%的人群可能正在進(jìn)行或許沒必要的降脂治療。
綜上所述，可以看出幾點(diǎn)：①在社區(qū)，有必要對(duì)所有人群尤其是對(duì)有臨床情況的人群的LDL-C值按臨床情況進(jìn)行危險(xiǎn)分層，按層級(jí)管理，在血脂化驗(yàn)單上增加危險(xiǎn)分層信息，無論對(duì)于有臨床情況的人群還是醫(yī)師本人，都能得到很好的提示和提醒，促使他們和醫(yī)生更好地朝目標(biāo)LDL-C值改善；②采用危險(xiǎn)分層標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行LDL-C值的管理，更貼近臨床，目標(biāo)更加明確，對(duì)指導(dǎo)臨床治療更有意義，使更多的有臨床情況的人群在降脂治療中獲益，有效降低心血管事件的發(fā)生。
參考文獻(xiàn)
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低密度脂蛋白范文3
關(guān)鍵詞：冠心病； 超敏C-反應(yīng)蛋白；低密度脂蛋白
【中圖分類號(hào)】R446.11【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1672-3783（2012）11-0119-01
冠心病（CHD）就是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管腔阻塞導(dǎo)致心肌缺氧而引起的心臟病。超敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）是近年來大量前瞻性臨床研究所證實(shí)的診斷和預(yù)測(cè)心血管事件發(fā)生及發(fā)展的極有意義的指標(biāo)，它不僅是一種慢性全身性炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物，而且還直接參與了動(dòng)脈粥樣硬化形成的過程。隨著生活水平的提高，冠心病（CHD）的發(fā)病率越來越高。研究表明炎癥反應(yīng)在心肌梗死發(fā)病機(jī)制中起重要作用。超敏c反應(yīng)蛋白（hs-CRP）是人體的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白血管炎癥反應(yīng)的標(biāo)記物，hs-CRP血清水平有助于區(qū)分血管疾病患者，而在CHD的發(fā)病中，低密度脂蛋白膽固醇（LDL—C）起著重要的作用。本文通過對(duì)98例（CHD）患者血清hs-CRP及低密度脂蛋白LDL-C資料綜合分析，探討hs-CRP、LDL-C與CHD關(guān)系。
1材料與方法
1.1對(duì)象：觀察組選取2010年6月至2012年7月住院的冠心病患者，男性60例，女性38例，年齡43-76歲，所有入選患者均排除腫瘤、免疫性疾病、風(fēng)濕、瓣膜病、糖尿病、貧血及其它炎性反應(yīng)性疾病。對(duì)照組為我院98名健康體檢者均排除冠心病，其中男性60名，女性38名，年齡45-69歲。試驗(yàn)組及對(duì)照組年齡和性別等方面無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
1.2方法：兩組患者標(biāo)本采集前分別于清晨空腹采血，分離血清后測(cè)定hs-CRP和LDL-C含量。
1.3儀器及試劑：儀器為日立7180全自動(dòng)生化分析儀，hs.CRP試劑為西班牙 BIOSYSTEMS原裝進(jìn)口試劑。LDL-C試劑為日本關(guān)東原裝進(jìn)口。試驗(yàn)檢測(cè)嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行，質(zhì)控均在范圍。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以表示，組間比較采用方差分析，P
2結(jié)果
對(duì)照組與觀察組是血清hs-CRP和LDL-C比較顯示，觀察組冠心病患者的濃度明顯高于對(duì)照組，兩組有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P
3討論
Hs-CRP是炎癥的一種敏感性指標(biāo)，炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起著非常重要的作用。有研究報(bào)道hs-CRP可以反映動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的成分并預(yù)測(cè)斑塊破裂的可能性，即CHD、急性冠脈綜合征患者h(yuǎn)s-CRP明顯升高，其升高水平與冠狀動(dòng)脈梗阻程度、CHD終末事件的發(fā)生及預(yù)后、充血性心力衰竭的程度等均有顯著相關(guān)性。本研究結(jié)果表明，hs-CRP是與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、演變和發(fā)展相關(guān)的促炎因子，hs-CRP在急性炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的斑塊不穩(wěn)定性中起重要作用。說明hs-CRP水平可以預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度和發(fā)生心血管事件的危險(xiǎn)性，對(duì)評(píng)估CHD具有重要的臨床意義。目前有大量的基礎(chǔ)研究結(jié)果證實(shí)LDL顆粒小、可透過內(nèi)膜、進(jìn)入動(dòng)脈內(nèi)皮下層。潴留在內(nèi)皮下的LDL被氧化修飾后可被巨噬細(xì)胞攝入，繼而變成泡沫細(xì)胞，后者融合并破裂，釋放出大量膽固醇，是構(gòu)成粥樣斑塊核心（脂質(zhì)池）的主要成分。所有已知的易損斑塊特性均與斑塊炎癥機(jī)制有關(guān)。LDL顆粒水平升高及隨后產(chǎn)生的氧化LDL水平升高可能是主要的炎癥激活因子，進(jìn)而導(dǎo)致脂質(zhì)核心生長(zhǎng)（在內(nèi)皮下酶水解后）；纖維帽變薄和全身炎癥標(biāo)志物水平升高。從而增加斑塊易損性，導(dǎo)致AS，危及患者生命。從基礎(chǔ)研究的結(jié)果支持，LDL是動(dòng)脈粥樣硬化性脂蛋白，是CHD發(fā)病的重要基礎(chǔ)。因此，在CHD的防治中降低LDL—C水平顯得極為重要。雖然TC測(cè)定的研究資料也很有價(jià)值，且與測(cè)定LDL-C作為觀察指標(biāo)的研究結(jié)果基本一致。但是，由于TC水平同時(shí)受HDL-C水平的影響，所以LDL-C能更準(zhǔn)確地反映個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)程度。由此可見LDL-C與hs-CRP聯(lián)合檢測(cè)可以判斷冠心病的嚴(yán)重程度，對(duì)于冠心病的診斷和治療有重要參考價(jià)值，值得臨床推廣。
參考文獻(xiàn)
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低密度脂蛋白范文4
關(guān)鍵詞 姜黃素 肝癌細(xì)胞 低密度脂蛋白受體 基因表達(dá) 小鼠 流式細(xì)胞儀
血清低密度脂蛋白膽固醇酯(LDL-C)的增高是引起動(dòng)脈粥樣硬化及心血管疾病的主要危險(xiǎn)因子之一。現(xiàn)在已很清楚低密度脂蛋白受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在低密度脂蛋白的代謝過程中起著重要作用。因此，通過藥物調(diào)節(jié)低密度脂蛋白受體的表達(dá)是控制血漿低密度脂蛋白膽固醇酯水平的一個(gè)有效途徑。近年的研究顯示姜黃素具有顯著降低血清脂質(zhì)過氧化物，增加高密度脂蛋白膽固醇，降低血清總膽固醇含量水平，以及調(diào)節(jié)脂蛋白代謝相關(guān)酶活性的作用[1-3]。肝臟是LDL-C代謝的主要器官，肝細(xì)胞膜上有表達(dá)豐富的低密度脂蛋白受體。為探討姜黃素調(diào)節(jié)血脂作用的分子機(jī)理，實(shí)驗(yàn)以小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F為材料，用姜黃素處理后，應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀對(duì)肝細(xì)胞攝取胞外DiI-LDL，進(jìn)行定性、定量分析。
1 材料與方法
1．1 材料：小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F購自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫；PRMI-1640培養(yǎng)基（Lot#1165062）為美國(guó)Gibcobrl公司產(chǎn)品；新生牛血清購自杭州四季青生物制品有限公司；姜黃素為標(biāo)準(zhǔn)品，購自安徽甙爾塔天然有機(jī)化合物信息中心；健康成人血漿購自浙江省中心血站；DiI熒光素（Lot#970807）購自美國(guó)Biotium公司；細(xì)胞培養(yǎng)板與培養(yǎng)瓶購自丹麥Nunclon公司；AKTA prime蛋白純化系統(tǒng)為瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司產(chǎn)品；Biofuge stratos超速冷凍離心機(jī)為德國(guó)Heraeus公司產(chǎn)品；80MX超高速離心機(jī)為日本日立公司產(chǎn)品；激光掃描共聚焦顯微鏡和FACSort流式細(xì)胞儀（美國(guó)ABBOTT）。
1．2 DiI-LDL的制備：取健康成人血漿，用序列超速離心法,以NaBr調(diào)節(jié)密度至1．019g/ml，用RT50轉(zhuǎn)頭，40000r/min，4℃離心22h。上層為乳糜微粒（CM）和極低密脂蛋白（VLDL），小心吸去。將余下血漿用NaBr調(diào)節(jié)密度至1．060g/ml，同樣條件離心22h，所得上層溶液即為L(zhǎng)DL。小心收集至50ml離心管，共得15ml。將得到的LDL裝入透析袋，在4℃冰箱中用1000ml含0．02%NaN3的生理鹽水透析，以除去高濃度的NaBr。12h換透析液1次，透析24h。取出后用聚乙二醇6000濃縮2h，最終得2ml濃縮液。進(jìn)一步純化使用Sepharose 6B柱，以含0．9%NaCl、0．02%NaN30．01mol/L的PBS溶液作為洗脫液，用AKTA prime蛋白純化系統(tǒng)分離蛋白質(zhì)。分離條件：加樣量：2ml；流速：0．3ml/min；收集：2ml/管；測(cè)定電壓：1mV；走紙：0．2mm/min。對(duì)分離所得的第二個(gè)蛋白質(zhì)洗脫峰用SDS-聚丙酰胺凝膠電泳分析，證實(shí)該蛋白質(zhì)確為L(zhǎng)DL。根據(jù)記錄儀所顯示的LDL峰，取相應(yīng)試管中的液體，合并為一管，共得34ml。將得到的LDL裝入透析袋，再用聚乙二醇6000濃縮5h，得到10ml的LDL，以Folin-Lowrry氏法測(cè)定LDL蛋白質(zhì)濃度。取2ml的LDL溶液與100mg不溶性馬鈴薯淀粉置于試管中渦旋震蕩，然后加入60μl DiI(用甲醇溶解，濃度為10mg/ml)4℃放置1h，液氮迅速冷凍，真空干燥器冷凍干燥，然后加入2ml 10mmol/L的Tricine azide(pH8．2)，4℃冰箱中孵育48h，每隔一定時(shí)間取出混勻1次。4℃2000r/min離心15min，去淀粉沉淀。取上清，用Biofuge stratos超速冷凍離心機(jī)于4℃下12000r/min離心15min，取上清，重復(fù)離心1次，所得的上清含DiI-LDL，以Folin-Lowrry氏法測(cè)定上清液中的蛋白質(zhì)濃度[4]。分裝，充氬氣，4℃保存（該試劑不可冰凍，4℃下可保存1～2個(gè)月）。
1．3 細(xì)胞培養(yǎng)與LDL的吸收測(cè)定：取一塊24孔培養(yǎng)板，將小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F培養(yǎng)在含10%新生牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，1．0×106個(gè)細(xì)胞/ml，2．5ml1640培養(yǎng)液/孔。實(shí)驗(yàn)設(shè)給藥組、對(duì)照組、背景控制組。給藥組（又分4組）：培養(yǎng)孔中分別加入姜黃素貯存原液，使其終濃度分別達(dá)到10、20、30、40μM。對(duì)照組和背景控制組不用姜黃素處理。24h后，各孔取1．5ml細(xì)胞液分別至1．5ml離心管中，3500r/min離心5min，去上清。各管加1ml無血清PRMI-1640培養(yǎng)液洗細(xì)胞2min，3500r/min離心5min，去上清。背景控制組，加1ml4%的甲醛固定細(xì)胞10min，使LDL受體功能失活。3500r/min離心5min,去上清。加1ml含15μg/mlDiI-LDL的無血清PRMI-1640培養(yǎng)液。其它各組分別直接加1ml含15μg/ml的DiI-LDL的無血清PRMI-1640培養(yǎng)液。各管在37℃下孵育4．5h，然后4℃下孵育0．5min，3500r/min離心5min,去上清。加1ml4%的甲醛固定細(xì)胞10min)。接著用PBS洗3次[5]。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察各組細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀定量測(cè)定細(xì)胞對(duì)DiI-LDL的吸收量。
2 結(jié)果
2．1 DiI-LDL配體熒光法檢測(cè)結(jié)果：通過LDL-R介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，肝細(xì)胞能夠吸收溶液中的DiI-LDL。細(xì)胞內(nèi)積累的熒光染料量反映了細(xì)胞表面LDL-R的活性[6]。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果表明10～40μM濃度的姜黃素誘導(dǎo)具活性的LDL-R的表達(dá)，增加肝細(xì)胞LDL-R的活性（詳見圖1）。
2．2 流式細(xì)胞儀定量測(cè)定結(jié)果：應(yīng)用流式細(xì)胞儀可檢測(cè)和定量分析細(xì)胞對(duì)DiI-LDL的攝取量。結(jié)果表明10～40μmol/L濃度的姜黃素顯著增加肝細(xì)胞LDL-R的活性(詳見圖2、圖3)。
3 討論
根據(jù)LDL受體介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑，一個(gè)LDL受體往返細(xì)胞內(nèi)外1周約需10min，因此在其20h的壽命中可以往返達(dá)數(shù)百次。這就意味著一個(gè)有功能的LDL受體可以攝取數(shù)百個(gè)LDL顆粒進(jìn)入細(xì)胞。利用LDL受體的這一功能，我們可以通過對(duì)其配體LDL進(jìn)行熒光素標(biāo)記后，與細(xì)胞一起孵育，應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡即可快速地定性檢測(cè)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀則可方便、準(zhǔn)確、
快速地進(jìn)行定量分析。選用小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F，一方面，肝臟是LDL-C代謝的主要器官，肝細(xì)胞膜上有表達(dá)豐富的低密度脂蛋白受體。另一方面，Hca-F為懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，非常適合用流式細(xì)胞儀分析。提高LDL-R的活性和降低血清LDL水平是防止動(dòng)脈粥樣硬化及心血管疾病的有效途徑。3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶是肝細(xì)胞合成膽固醇的限速酶。它的抑制劑，如他汀類，有些已作為降膽固醇藥用于臨床，但最近的研究表明，他汀類藥物存在一些潛在的副作用，如肝損傷、肌痛、多發(fā)性神經(jīng)疾病等[7-8]。
現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)也證明中藥姜黃可以通過調(diào)節(jié)血脂水平而起到治療高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化癥的作用，進(jìn)一步的研究顯示姜黃素是這一藥物中最具活性的調(diào)脂化合物，并證明具有上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞[9]和人永生化淋巴細(xì)胞LDL受體基因表達(dá)的作用[5]。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明姜黃素是一個(gè)非常強(qiáng)的LDL受體基因表達(dá)促進(jìn)劑，能極其顯著地增加肝細(xì)胞對(duì)LDL的攝取。
如果病人的LDL-R都是沒有活性的，那么僅僅增加其表達(dá)量是沒有意義的。但是絕大數(shù)家族性高膽固醇血脂的患者是LDL-R缺陷型的雜合子。他們產(chǎn)生二分之一數(shù)量功能正常的LDL-R，他們血漿中LDL顆粒的數(shù)量比正常人平均要高2．5倍[10]。實(shí)驗(yàn)表明姜黃素足以能夠?qū)⒕奘杉?xì)胞和肝細(xì)胞的LDL-R數(shù)量調(diào)高1倍，從而降低異常升高的血漿LDL水平。很顯然，姜黃素將是一個(gè)潛在的有效降膽固醇新藥。
4 參考文獻(xiàn)
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低密度脂蛋白范文5
【關(guān)鍵詞】腦梗死;血漿同型半胱氨酸;氧化低密度脂蛋白
傳統(tǒng)的腦血管疾病的危險(xiǎn)因素是高血壓、高脂血癥、糖尿病、吸煙、頸動(dòng)脈斑塊及家族史等。近年來,血漿同型半胱氨酸 (homocysteine,Hcy)增加作為腦血管疾病的危險(xiǎn)因子越來越受到重視。研究證實(shí)血栓性疾病患者血漿 Hcy水平增高[1,2]。氧化低密度脂蛋白(oxidativelow density lipoprotein, ox2 LDL)作為腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素已被認(rèn)同。本研究重點(diǎn)分析腦梗死患者血漿Hcy與ox2 LDL 之間的關(guān)系,為腦梗死的臨床防治提供理論依據(jù)。
1 資料與方法
1. 1 研究對(duì)象 觀察組:2005年4月至2007年1月于我院神經(jīng)內(nèi)科住院的腦梗死患者 85 例,男 67 例,女18例,年齡(65. 16 ±9.74)歲 。所有患者均符合第四屆全國(guó)腦血管病會(huì)議制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3],并經(jīng)頭顱影像學(xué)檢查〔包括頭顱 CT 和(或) MRI〕證實(shí)。研究對(duì)象之間無親緣關(guān)系,排除近 9 個(gè)月內(nèi)用過抗癲癇藥、 多巴胺類藥物、 葉酸和 B 族維生素等,且排除心肌梗死、 心絞痛、 糖尿病、 肝腎功能不全和癌癥。對(duì)照組:健康成人 32 例,男 24 例,女 8 例,年齡 ( 58.31 ±9.27)歲。 上述入選者經(jīng)臨床檢查除外貧血、 嚴(yán)重肝腎功能不全、 甲狀腺疾病、 惡性腫瘤等疾病。
1. 2 標(biāo)本的收集及測(cè)定 患者入院后在服用調(diào)血脂藥物之前,清晨空腹安靜狀態(tài)下采靜脈血,以全自動(dòng)熒光偏振免疫分析法[4]測(cè)定 Hcy,用 E LISA方法測(cè)定ox2 LDL。
1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料數(shù)據(jù)以( x ±s )表示,兩均數(shù)間比較采用非配對(duì) t 檢驗(yàn),相關(guān)性用直線回歸分析,以 P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2. 1 85 例腦梗死患者與對(duì)照組血漿 Hcy分別為(14. 73 ± 5. 32)μmol/ L 和(9. 32 ±4. 72)μmol/ L,兩者比較差異顯著(P< 0. 01) 。
2. 285例腦梗死患者與對(duì)照組血ox2 LDL 分別為(712. 83 ± 213. 92)μg/ L 和(402. 13 ± 187. 61)μg/ L,兩者比較差異顯著(P< 0. 01) 。
2. 3 在腦梗死患者中 Hcy與ox2 LDL 呈顯著正相關(guān)( Y = 0. 76, X = 1. 9, r = 0. 725, P
3討論
近年來大量研究證實(shí),高 Hcy 血癥是動(dòng)脈粥樣硬化疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一,并與缺血性腦血管病密切相關(guān),血漿同型半胱氨酸水平升高是中風(fēng)的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因子.可能是 Hcy 促進(jìn)氧自由基和過氧化氫的生成,引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和毒性作用以及促進(jìn)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增生,并激活血小板的黏附和聚集,導(dǎo)致患者動(dòng)脈粥樣硬化和栓塞[5]。本研究表明, 腦梗死組血漿 Hcy 水平顯著高于正常對(duì)照組,表明 Hcy 參與腦梗死的發(fā)生發(fā)展過程。研究表明,ox2 LDL 是LDL 在體內(nèi)經(jīng)多種自由基離子或其它致氧化因素修飾后形成的,這一過程無負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用導(dǎo)致大量膽固醇蓄積,因而ox2 LDL被認(rèn)為是致動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵因素或始動(dòng)因子[6]。本研究表明, 腦梗死組血漿ox2 LDL 水平顯著高于對(duì)照組,進(jìn)一步證實(shí)了ox2 LDL 參與腦梗死的發(fā)生發(fā)展過程。我們對(duì)腦梗死患者的 Hcy 和 ox2 LDL進(jìn)行相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)兩者呈顯著的正相關(guān),說明他們可能是通過共同的機(jī)制參與了腦動(dòng)脈硬化的形成,從而引起腦梗死的發(fā)生。
【參考文獻(xiàn)】
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低密度脂蛋白范文6
關(guān)鍵詞：氧化低密度脂蛋白；THP-1細(xì)胞；細(xì)胞凋亡；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
中圖分類號(hào)：R329.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-1349（2011）08-0973-03
近年來,細(xì)胞凋亡在動(dòng)脈粥樣硬化的形成和進(jìn)展中的作用日漸成為研究熱點(diǎn),斑塊破裂伴血栓形成是造成動(dòng)脈粥樣硬化臨床急性癥狀的主要原因,而大量的細(xì)胞凋亡直接造成斑塊不穩(wěn)定［1］。巨噬細(xì)胞通過對(duì)斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量、炎癥反應(yīng)、纖維成分的降解及新血管形成等方面來影響動(dòng)脈粥樣硬化病變的進(jìn)展,在動(dòng)脈粥樣硬化形成的所有階段都起著極其重要的作用［2］。氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）是動(dòng)脈粥樣硬化重要的危險(xiǎn)因素,ox-LDL被巨噬細(xì)胞大量吞噬后會(huì)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)大量膽固醇的聚集并進(jìn)一步形成泡沫細(xì)胞，同時(shí)會(huì)導(dǎo)致血循環(huán)中的單核細(xì)胞向內(nèi)皮表面黏附并不斷向內(nèi)皮下趨化,并在內(nèi)皮下分化成常駐的巨噬細(xì)胞［3］。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能的損傷引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS），通過激活未折疊蛋白質(zhì)反應(yīng)（UPR）以保護(hù)由ERS所引起的細(xì)胞損傷，長(zhǎng)期過強(qiáng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激便會(huì)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)性細(xì)胞凋亡［4］。不同于經(jīng)典的凋亡途徑，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性凋亡途徑是一種最近提出的新的凋亡途徑，研究其發(fā)生機(jī)制可為動(dòng)脈粥樣硬化等相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供新的方向。本研究主要探討ox-LDL對(duì)人單核巨噬細(xì)胞（THP-1）凋亡的影響及其引起凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 CO2孵箱（HERA cell 150）,倒置顯微鏡（Nikon TS100，日本）,超凈工作臺(tái)（LONGHONG，中國(guó)）,恒溫水浴箱（HS-4，成都儀器廠）,低溫臺(tái)式離心機(jī)（Labofuge 400R，Heraeus），F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）。
1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 人 THP-1單核細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞庫。ox-LDL由北京醫(yī)科大附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)。RPMI1640培養(yǎng)基（GIBCO公司，美國(guó)）,10%胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）,胰蛋白酶（solarbio,Spain），PMA（Sigma,美國(guó)），鼠抗人GRP78、Caspase-12、CHOP一抗及羊抗鼠IgG二抗均購自Santa Cruz美國(guó)公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與誘導(dǎo) 將人THP-1單核細(xì)胞懸浮于含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液中，在5% CO2、37℃、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。在光學(xué)顯微鏡下可見細(xì)胞呈球形，懸浮狀態(tài)。視細(xì)胞生長(zhǎng)情況進(jìn)行傳代、換液，選擇生長(zhǎng)良好的第3代～第5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前在培養(yǎng)液中加入終濃度為100 mmol/L的PMA孵育48 h，誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。在光學(xué)顯微鏡下可見細(xì)胞轉(zhuǎn)化為貼壁狀態(tài)，并伸出偽足，呈現(xiàn)巨噬細(xì)胞形態(tài)。
1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 對(duì)照組:細(xì)胞置1640培養(yǎng)基中于5% CO2、37 ℃、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。ox-LDL組:在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中分別加入ox-LDL（25 μg/mL、50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL）在1640培養(yǎng)基中于5% CO2、37 ℃、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。在細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中加入ox-LDL 75 μg/mL在1640培養(yǎng)基中于5% CO2、37 ℃、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h、48 h、72 h。
1.2.3 細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 采用Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記染色法進(jìn)行檢測(cè)，分組分孔收集細(xì)胞（1×106個(gè)），1 000 r/min離心5 min，棄上清液，每管用200 μL PBS重懸成單細(xì)胞懸液。加入10L Annexin V-FITC和5L PI，加入300L Binding Buffer輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，以凋亡的巨噬細(xì)胞占巨噬細(xì)胞總數(shù)的百分比為凋亡率。
1.2.4 Western blot測(cè)GRP78、Caspase-12、CHOP的表達(dá) 分組分孔收集細(xì)胞（1×106個(gè)）,進(jìn)行免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白的表達(dá)。將每管細(xì)胞洗滌,離心,用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,在其中加入等體積的樣品緩沖液混勻，沸水煮沸5 min，使蛋白質(zhì)變性，將蛋白質(zhì)分裝并凍存于-70 ℃冰箱中保存。取樣品蛋白質(zhì)100 μg,用10%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)膜、封閉，依次加入一抗4 ℃孵育過夜，二抗孵育2 h后，ECL發(fā)光液孵育5 min后，置于圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像掃描及強(qiáng)度分析。
1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，多重比較采用LSD法，P
2 結(jié) 果
2.1 ox-LDL對(duì)THP-1細(xì)胞凋亡的影響 各組細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好， ox-LDL處理的細(xì)胞則出現(xiàn)凋亡細(xì)胞。與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
表1 不同濃度ox-LDL作用THP-1細(xì)胞
48 h后凋亡情況（x±s）%
表2 75 μg/mL ox-LDL作用于THP-1細(xì)胞
凋亡情況（x±s）%
2.2 各組細(xì)胞GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白的表達(dá) 常規(guī)培養(yǎng)的對(duì)照組無GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白的表達(dá)，用50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL濃度的ox-LDL培養(yǎng)細(xì)胞48 h后 GRP78、CHOP、Caspase-12表達(dá)均增加。詳見圖 1。
注：1為對(duì)照組，2為50μg/mL組，3為100μg/mL組，4為200 μg/mL組。
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圖1 各組細(xì)胞GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白的表達(dá)
3 討 論
細(xì)胞凋亡是動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要特征之一,其中巨噬細(xì)胞凋亡貫穿動(dòng)脈粥樣硬化的整個(gè)過程。巨噬細(xì)胞泡沫化及其最終凋亡的過程中泡沫細(xì)胞聚集壞死形成脂核并使其不斷增大,導(dǎo)致臨件發(fā)生［5］。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)折疊和鈣離子存儲(chǔ)的主要場(chǎng)所，對(duì)多種生理功能的完成具有重要意義。然而，細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的改變導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)氧化環(huán)境被破壞，鈣代謝紊亂，突變的蛋白質(zhì)產(chǎn)生或蛋白質(zhì)的二硫鍵不能形成，大量異常的蛋白質(zhì)聚集在細(xì)胞內(nèi)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)失衡，這種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能紊亂狀態(tài)被稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激［6］。 GRP78被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的中心調(diào)節(jié)劑，也被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志，但是過強(qiáng)或時(shí)間過長(zhǎng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡［7］。Caspase-12 激活是觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡途徑的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。Caspase-12 以酶原形式存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜胞漿側(cè),在ERS 時(shí)被特異激活而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［8］。CHOP也是觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡途徑的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。CHOP 又稱生長(zhǎng)停滯及DNA 損傷基因（Growth Arrestand DNA Damage Induciblegene 153,GADD 153）,存在于細(xì)胞漿內(nèi),在ERS 時(shí)被活化轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核,通過下調(diào)Bcl-2 表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 本實(shí)驗(yàn)以不同濃度的ox-LDL與THP-1細(xì)胞共同培養(yǎng)不同時(shí)間,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ox-LDL以時(shí)間和濃度依賴的方式誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞的凋亡。ox-LDL濃度為100 μg/mL作用48 h最明顯。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度增加THP-1細(xì)胞凋亡呈遞增后遞減變化。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激啟動(dòng)的凋亡途徑是近年才發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡途徑，用ox-LDL培養(yǎng)人THP-1細(xì)胞并檢測(cè)Caspase12、CHOP、GRP78蛋白的變化來探討ox-LDL是否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)果發(fā)現(xiàn)100 μg/mL 的ox-LDL作用于細(xì)胞48 h后,GRP78、Caspase-12、CHOP的表達(dá)都明顯增加,提示ox-LDL可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引發(fā)細(xì)胞凋亡。 不同于線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑，ERS引起的細(xì)胞凋亡有一套自身的信號(hào)傳遞通路，稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)性死亡（ER-associated death，ERAD）途徑，而且參與ERS 的分子伴侶和感受蛋白是ERS 特異誘導(dǎo)的，因此能夠作為治療相關(guān)疾病的有效靶點(diǎn)。
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作者簡(jiǎn)介：張峰娟（1981―），女，醫(yī)師，現(xiàn)為山西醫(yī)科大學(xué)2008級(jí)研究生（郵編：030001）；邊云飛，工作于山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院；劉金帥，工作于潞安集團(tuán)總醫(yī)院。