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實(shí)驗(yàn)對(duì)象與方法

1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組

健康雄性2月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠56只，體質(zhì)量220g±10g，購于山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK魯20090008）。分籠飼養(yǎng)，每籠4只；普通鼠全價(jià)顆粒飼料Ⅱ號(hào)，自由飲食、飲水，室溫22℃±2℃，相對(duì)濕度40%~60%。按照本實(shí)驗(yàn)要求將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為：安靜對(duì)照組(S組，n=8)、運(yùn)動(dòng)對(duì)照組(E組，n=24)、中藥運(yùn)動(dòng)組(CE組，n=24)。最后一次力竭運(yùn)動(dòng)后又將E組和CE組分別隨機(jī)分為運(yùn)動(dòng)后即刻組(E0組，n=8、CE0組，n=8)，恢復(fù)期12h組(E1組，n=8、CE1組，n=8)，恢復(fù)期24h組(E2組，n=8、CE2組，n=8)。

2.實(shí)驗(yàn)方法

1)運(yùn)動(dòng)方案

S組不施加任何干擾因素，給食給水，置于籠中自然生長。E組和CE組按照制定的運(yùn)動(dòng)方案進(jìn)行跑臺(tái)訓(xùn)練。運(yùn)動(dòng)速度、時(shí)間根據(jù)Bedford理論[7]設(shè)計(jì)，大鼠體質(zhì)量/攝氧量回歸方程所建立的遞增速度和時(shí)間的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方式。參考國內(nèi)學(xué)者[8-9]使用過的運(yùn)動(dòng)疲勞模型，并根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況略加修改，取材前最后一次運(yùn)動(dòng)至力竭。具體運(yùn)動(dòng)速度和時(shí)間安排如表1所示。

2)給藥方案

復(fù)方中藥制備：由肉桂3g，人參、白術(shù)、茯苓、甘草、當(dāng)歸、川芎、白芍藥、熟地、補(bǔ)骨脂各9g組成，藥物購自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，水煎過濾濃縮為1g/mL，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。CE組給予復(fù)方中藥水溶劑1mL/100g灌胃，S組和E組灌服1mL/100g生理鹽水（0.9%），每次運(yùn)動(dòng)前3h灌胃。

3)動(dòng)物取材

最后一次力竭運(yùn)動(dòng)后，S組、E0組、CE0組立即腹腔注射10%水合氯醛糖漿（0.3mL/100g）麻醉，打開腹腔腹主動(dòng)脈取血5mL置于試管中，37℃水浴30min后3500r/min轉(zhuǎn)速離心15min取上層血清，待測(cè)血清肌酸激酶（CK）、尿素氮（BUN）、睪酮（T）。迅速剝離取出后肢股四頭肌，置于冰冷生理鹽水中洗凈血漬，用濾紙吸干，置于EP管內(nèi)，放于–80℃超低溫冰箱內(nèi)冷凍待勻漿后測(cè)骨骼肌丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。E1組、CE1組和E2組、CE2組分別于運(yùn)動(dòng)后12h和24h做上述同樣取材。

4)骨骼肌組織勻漿制備

稱取洗凈血漬并用濾紙吸干的股四頭肌0.3g，剪碎倒入玻璃勻漿管中，加入2.7mL冰冷的生理鹽水，充分研碎，使組織勻漿化。將制備好的10%骨骼肌勻漿液用低溫離心機(jī)2000r/min轉(zhuǎn)速離心15min后取上清液，待測(cè)骨骼肌勻漿液蛋白濃度及MDA含量和SOD活性。

5)測(cè)試方法及儀器

用ECOM-F6124半自動(dòng)生化分析儀（德國產(chǎn)）測(cè)CK（速率法）和BUN（酶偶聯(lián)速率法）；用ACCESS全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)（美國和法國合產(chǎn)）測(cè)T（化學(xué)發(fā)光法）；用722s可見分光光度計(jì)（中國產(chǎn)）測(cè)骨骼肌MDA（TBA法）、SOD（黃嘌呤氧化酶法），具體操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

6)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析采用SPSS17.0軟件系統(tǒng)，結(jié)果數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）表示。對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析；對(duì)S組、E組、CE組不同時(shí)相之間MDA和SOD采用單因素方差分析（One-WayANOVA）分析，在方差分析前對(duì)樣本進(jìn)行齊次性檢驗(yàn)，當(dāng)樣本所在總體方差不齊性時(shí)，應(yīng)采用Tamhane方法進(jìn)行后續(xù)檢驗(yàn)的多重比較（PostHocMultipleComparisons）；總體方差齊性，采用LSD方法進(jìn)行后續(xù)檢驗(yàn)的多重比較。顯著性差異水平為P﹤0.05，極顯著性差異水平P﹤0.01。

結(jié)果

1.運(yùn)動(dòng)對(duì)照組大鼠血清CK、BUN、睪酮與安靜對(duì)照組比較結(jié)果：S組、E0組、E1組、E2四組之間血清CK、BUN、T指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表2所示。上表顯示，血清CK，E0組顯著性高于S組（P﹤0.05）；E1組顯著性高于E0組（P﹤0.05）；E1組、E2組顯著性高于S組（P﹤0.01）。血清BUN，E0組顯著性高于S組（P﹤0.05）；E1組顯著性低于E0組（P﹤0.05），E2組顯著性低于E0組（P﹤0.01）。血清T，E0組顯著性低于S組（P﹤0.01）。

2.運(yùn)動(dòng)對(duì)照組疲勞及恢復(fù)期不同時(shí)相骨骼肌MDA和SOD變化結(jié)果：S組、E0組、E1組、E2四組之間骨骼肌MDA含量和SOD活性進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表3所示。

3.中藥運(yùn)動(dòng)組疲勞及恢復(fù)期不同時(shí)相骨骼肌MDA和SOD變化結(jié)果：S組、CE0組、CE1組、CE2四組之間骨骼肌MDA含量和SOD活性進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表4所示。上表顯示，大鼠骨骼肌MDA，CE0組顯著高于S組（P﹤0.01），CE1組、CE2組顯著低于CE0組（P﹤0.01）且與S組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。骨骼肌SOD，CE1組、CE2組顯著高于CE0組（P﹤0.01），CE2組顯著高于S組（P﹤0.05）。

4.各組相同時(shí)相MDA含量比較結(jié)果：對(duì)S組、E組、CE組在運(yùn)動(dòng)后即刻、恢復(fù)期12h、恢復(fù)期24h的MDA含量分別進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下圖所示。圖1顯示，運(yùn)動(dòng)后即刻，運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E0）組和中藥運(yùn)動(dòng)（CE0）組骨骼肌MDA都顯著高于安靜對(duì)照（S）組（P﹤0.01），中藥運(yùn)動(dòng)組顯著低于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P﹤0.01）?；謴?fù)期12h，運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E1）組顯著高于安靜對(duì)照（S）組（P﹤0.01），中藥運(yùn)動(dòng)（CE1）組顯著低于運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E1）組（P﹤0.01）且與安靜對(duì)照（S）組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。恢復(fù)期24h，各組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5.各組相同時(shí)相SOD活性比較結(jié)果：對(duì)S組、E組、CE組在運(yùn)動(dòng)后即刻、恢復(fù)期12h、恢復(fù)期24h的SOD活性分別進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下圖所示。圖2顯示，運(yùn)動(dòng)后即刻，運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E0）組和中藥運(yùn)動(dòng)（CE0）組骨骼肌SOD活性都下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?；謴?fù)期12h，運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E1）組骨骼肌SOD活性顯著低于安靜對(duì)照（S）組（P﹤0.05），中藥運(yùn)動(dòng)（CE1）組顯著高于運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E1）組（P﹤0.01）。恢復(fù)期24h，中藥運(yùn)動(dòng)（CE2）組顯著高于安靜對(duì)照（S）組和運(yùn)動(dòng)對(duì)照（E2）組（P﹤0.05）。

6.各組大鼠跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間：運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（E組）和中藥運(yùn)動(dòng)組（CE組）大鼠最后一次以38m/min的速度運(yùn)動(dòng)至力竭，運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間如表5所示。上表顯示出，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間為66.78min±3.53min，而中藥運(yùn)動(dòng)組力竭時(shí)間為82.09min±5.19min，顯著高于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P﹤0.01），平均延長比率為23.2%。

分析與討論

1.運(yùn)動(dòng)疲勞模型本實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)疲勞模型：采用大鼠7周大強(qiáng)度遞增負(fù)荷跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)方式，運(yùn)動(dòng)方案根據(jù)Bedford大鼠體質(zhì)量/攝氧量回歸方程所建立的遞增速度或時(shí)間的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方式設(shè)計(jì)[7]。第1周運(yùn)動(dòng)速度15m/min、時(shí)間20min，小于60%O2max；第2~6周運(yùn)動(dòng)速度22~35m/min、時(shí)間20~30min，屬于70~95%O2max；第7周運(yùn)動(dòng)速度38m/min、時(shí)間30min，屬大于95%O2max；取材前最后一次運(yùn)動(dòng)至力竭（運(yùn)動(dòng)速度38m/min，運(yùn)動(dòng)時(shí)間50~60min，根據(jù)Bedford理論推斷屬于100%O2max）。大量研究表明，力竭運(yùn)動(dòng)后血清BUN顯著性高于安靜對(duì)照組（P﹤0.05）、血清T顯著性低于安靜對(duì)照組（P﹤0.05）、MDA顯著性高于安靜對(duì)照組（P﹤0.05）、SOD低于安靜對(duì)照組（P﹤0.05）[9-12]。本實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)過7周大強(qiáng)度遞增負(fù)荷跑臺(tái)訓(xùn)練后，測(cè)得大鼠血清及骨骼肌相關(guān)指標(biāo)如表2、表3顯示，運(yùn)動(dòng)后即刻血清BUN、MDA明顯高于對(duì)照組（P﹤0.05）、血清T明顯低于對(duì)照組（P﹤0.05）、SOD低于對(duì)照組。該結(jié)果完全符合前人相關(guān)研究的結(jié)論，表明本實(shí)驗(yàn)中使用的7周大強(qiáng)度遞增負(fù)荷跑臺(tái)訓(xùn)練疲勞模型已成功建立。#p#分頁標(biāo)題#e#

2.復(fù)方中藥對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞及恢復(fù)期不同時(shí)相骨骼肌MDA含量的影響：丙二醛（MDA）是機(jī)體生物膜中的多不飽和脂肪酸（PUFA）受到通過酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生的氧自由基攻擊后，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用而產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物。所以，MDA含量?？砷g接反映出機(jī)體細(xì)胞膜受自由基攻擊的程度[12]。本實(shí)驗(yàn)研究表明，大鼠骨骼肌MDA含量，運(yùn)動(dòng)后即刻，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組、中藥運(yùn)動(dòng)組顯著高于安靜對(duì)照組（P﹤0.01），但中藥運(yùn)動(dòng)組明顯低于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P﹤0.01）；恢復(fù)期12h，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組顯著高于安靜對(duì)照組（P﹤0.05），而中藥運(yùn)動(dòng)組和安靜對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（見表3、4和圖1）。這是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)疲勞模型為7周遞增大負(fù)荷跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)且最后一次運(yùn)動(dòng)至力竭，所以，造成運(yùn)動(dòng)對(duì)照組和中藥運(yùn)動(dòng)組在運(yùn)動(dòng)后即刻骨骼肌MDA含量明顯高于安靜對(duì)照組[13]。但是，運(yùn)動(dòng)后即刻中藥運(yùn)動(dòng)組明顯低于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組，而且恢復(fù)期12h運(yùn)動(dòng)對(duì)照組顯著高于安靜對(duì)照組，同時(shí)中藥運(yùn)動(dòng)組與安靜對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說明中藥運(yùn)動(dòng)組骨骼肌MDA含量在恢復(fù)期12h恢復(fù)到正常水平。這是因?yàn)槊看芜\(yùn)動(dòng)前對(duì)中藥運(yùn)動(dòng)組大鼠進(jìn)行復(fù)方中藥灌胃，而復(fù)方中藥中的人參、當(dāng)歸、川芎、甘草、芍藥、肉桂、補(bǔ)骨脂等成分中含有較多的人參皂苷、微量元素、氨基酸、還原糖、磷脂、維生素、葉酸、甘草酸、芍藥苷、香豆素和黃酮類等活性成分，這些成分同時(shí)在體內(nèi)能夠強(qiáng)化其活性，更加有效參與機(jī)體清除自由基，減少脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，有較強(qiáng)的抗氧化功能[3,5-6,14-16]。其機(jī)理主要為：1）八珍湯具有“益氣、養(yǎng)血、補(bǔ)腎”的功效，機(jī)體可以通過益氣提高了骨骼肌抗損傷的能力，減輕了因過度疲勞而造成的骨骼肌損傷程度；通過補(bǔ)血改善了大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)骨骼肌缺血缺氧的現(xiàn)象，減輕骨骼肌損傷，從根源上減少了產(chǎn)生自由基的刺激，自由基的生成相對(duì)減少。2）復(fù)方中藥的補(bǔ)血功能可以加速血液循環(huán)，把過多的自由基運(yùn)走，加速氧自由基的排泄，使骨骼肌自由基的含量減少[17]。提示，此復(fù)方中藥能夠有效抑制自由基的生成并加速自由基的清除，減少骨骼肌MDA的含量。

3.復(fù)方中藥對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞及恢復(fù)期不同時(shí)相骨骼肌SOD活性的影響：超氧化物歧化酶（SOD）是機(jī)體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶之一，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（O2-）保護(hù)細(xì)胞免受損傷，其活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力[12]。本實(shí)驗(yàn)中運(yùn)動(dòng)后即刻，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組和中藥運(yùn)動(dòng)組骨骼肌SOD活性都比安靜對(duì)照組有所降低，但都不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?；謴?fù)期12h，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組骨骼肌SOD活性顯著低于安靜對(duì)照組（P﹤0.05），而中藥運(yùn)動(dòng)組顯著高于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P﹤0.01）?；謴?fù)期24h，中藥運(yùn)動(dòng)組顯著高于安靜對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P﹤0.05）（見表3、4和圖2）。運(yùn)動(dòng)后即刻運(yùn)動(dòng)對(duì)照組和中藥運(yùn)動(dòng)組骨骼肌SOD活性之所以降低，是因?yàn)樵谶f增大負(fù)荷以及最后一次力竭運(yùn)動(dòng)過程中機(jī)體產(chǎn)生大量自由基，自由基會(huì)很大程度攻擊骨骼肌組織細(xì)胞，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化。此時(shí)，抗氧化系統(tǒng)消除自由基的能力相對(duì)減弱，表現(xiàn)為抗氧化酶以及合成抗氧化酶所必須的物質(zhì)被大量消耗（如，鐵、銅、鋅、錳等）致使抗氧化酶活性下降[18]。到恢復(fù)期12h時(shí)，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組骨骼肌繼續(xù)降低，并顯著低于安靜對(duì)照組；此時(shí)，中藥運(yùn)動(dòng)組已升高，并顯著高于E1組和CE0組。恢復(fù)期24h時(shí)，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組恢復(fù)至正常水平，而中藥運(yùn)動(dòng)組已經(jīng)顯著高于安靜對(duì)照組。這些變化說明此復(fù)方中藥能有效提高骨骼肌SOD活性，主要是由于此復(fù)方中藥中含有的黃酮化合物（補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸、甘草）、多種微量元素（熟地黃）、氨基酸和維生素（當(dāng)歸）等多種抗氧化成分,能較顯著提高骨骼肌SOD活性,降低機(jī)體脂質(zhì)過氧化水平,減輕自由基脂質(zhì)過氧損傷,使骨骼肌組織細(xì)胞膜穩(wěn)定性增強(qiáng),代謝能力和抗損傷能力增強(qiáng)，這些非酶類抗氧化劑的補(bǔ)充還可有效清除運(yùn)動(dòng)中生成的自由基[19]。提示，此復(fù)方中藥能夠有效提高骨骼肌SOD的活性。

3.4復(fù)方中藥對(duì)大鼠力竭時(shí)間（運(yùn)動(dòng)能力）影響：本實(shí)驗(yàn)研究表明，中藥運(yùn)動(dòng)組進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)至力竭的時(shí)間顯著高于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P﹤0.01），平均延長運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率為23.2%（如表5）。主要是因?yàn)?，該?fù)方中藥（八珍加肉桂補(bǔ)骨脂湯）能夠通過清除運(yùn)動(dòng)中骨骼肌產(chǎn)生的自由基以及提高SOD活性，延長大鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間，增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力；還可以縮短運(yùn)動(dòng)后疲勞恢復(fù)的時(shí)間，使機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力得到快速恢復(fù)。說明此復(fù)方中藥能減緩疲勞產(chǎn)生，且加速疲勞恢復(fù)，顯著提高大鼠運(yùn)動(dòng)能力。

結(jié)論

（1）長期遞增大負(fù)荷并至力竭運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致骨骼肌MDA含量明顯升高，降低運(yùn)動(dòng)能力。（2）“八珍加肉桂補(bǔ)骨脂湯”復(fù)方中藥能夠降低運(yùn)動(dòng)后大鼠骨骼肌MDA含量和提高SOD活性，有效地清除自由基，增強(qiáng)抗氧化作用，從而延長運(yùn)動(dòng)時(shí)間，促進(jìn)疲勞恢復(fù)，提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力。（本文圖表略）

本文作者：田詩彬 陳萬 高麗 吳春燕 田雪文 任雷杰 單位：山東體育學(xué)院 研究生部 山東體育學(xué)院 基礎(chǔ)理論系